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目的:1.通过研究大鼠脊髓损伤后自噬表达的情况及不同时间点表达变化,为脊髓损伤继发性损伤的研究提供新的思路。2.通过研究大鼠脊髓损伤后富氢水对于大鼠功能恢复的作用及脊髓组织的自噬表达影响,初步探讨富氢水治疗脊髓损伤的可能机制方法:选取清洁级SD雌性大鼠50只,体重(260±30)g,随机分成三组:假手术组10只,对照组20只,实验组20只。假手术组仅咬除T11-T12椎板,暴露但不损伤脊髓;对照组大鼠采用改良Allen打击法建立脊髓损伤模型后每日腹腔注射0.9%生理盐水,一天一次;实验组大鼠采用改良Allen打击法建立脊髓损伤模型后每日腹腔注射含氢量160ppm的富氢水,一天一次。模型建立成功,术后连续14天给药,并于每日记录各组大鼠BBB评分情况。在术后1d、3d、7d、14d利用Western blot法检测大鼠自噬相关蛋白LC3I、LC3II、Beclin1的表达情况,利用免疫组化检测大鼠自噬蛋白Beclin1分布及表达情况,并在透射电镜下观察神经细胞的超微结构及自噬体形成情况。结果:1.实验组大鼠在术后1d、3dBBB评分略高于对照组,在术后7d、14dBBB评分明显高于对照组,差异有统计学意义(p<0.05)2.Western blot大鼠脊髓组织检测结果显示:与假手术组相比,脊髓损伤后,Beclin1的表达量增加,LC3II/LC3值增加。实验组与对照组对比,各时间点实验组Beclin1的表达量、LC3II/LC3值均小于对照组,差异有统计学意义(p<0.05)。3.免疫组化结果显示:Beclin1蛋白在胞浆中表达,通过Image ProPlus6.0软件测算蛋白平均光密度值发现实验组在各时间点的蛋白平均光密度值均低于对照组,差异有统计学意义(p<0.05)4.在透射电镜的结果中镜下假手术组神经膜及细胞器基本正常,自噬体少见,而实验组及对照组在伤后1d、3d脊髓组织可见到大量的自噬体,细胞器肿胀破坏严重,伤后7d、14d两组的存活神经细胞的结构逐渐恢复正常,但富氢水组复优于生理盐水组。结论:1.正常情况下,大鼠的脊髓组织中自噬呈低水平表达以维持细胞稳态。当发生脊髓损伤后,脊髓自噬的相关蛋白表达上调,在3天后达到峰值,随后呈下降趋势,在术后14天仍有较高的表达,表明脊髓损伤后自噬过度表达,引起细胞自噬性死亡,这个可能是脊髓继发性损伤的重要机制之一。2.富氢水治疗能够提高大鼠脊髓损伤后后肢功能的恢复,并且下调自噬相关蛋白的表达,减少细胞自噬性死亡,对于脊髓的损伤起一种保护作用,表明脊髓损伤下调细胞自噬是富氢水治疗脊髓损伤的机制。