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目的:研究γ-分泌酶抑制剂DAPT阻断Notch信号通路后,Wnt信号通路中的wnt1、β-catenin及肌成纤维细胞标志因子α-SMA的表达变化,探讨Wnt/-catenin信号通路与Notch信号通路之间存在直接或间接的相互作用以及Wnt/-catenin信号通路在DAPT抑制肺成纤维细胞表型转化中的作用表达。方法:(1)从出生2-3天SD大鼠的幼鼠中取得肺组织,采用胰酶消化法分离培养出肺成纤维细胞,并使用波形蛋白(Vimentin)免疫细胞化学方法检测培养至第三代肺成纤维细胞的纯度;(2)予无血清的DMEM培养基同步培养细胞24h,并将其分为对照组、TGF-β1组、TGF-β1+DAPT组;(3)分别在TGF-β1组和TGF-β1+DAPT组中加入5ng/ml TGF-β1诱导成纤维细胞转化为肌成纤维细胞,并在TGF-β1+DAPT组中加入500nmol/L的DAPT抑制纤维细胞增殖,并作用于肺成纤维细胞24h,观察其形态学改变;(4)分别采用RT-PCR法检测α-SMA、wnt1及β-catenin的mRNA表达变化,Western blot法检测β-catenin的蛋白表达变化;(5)采用SPASS13.0统计软件进行统计学分析,两样本均数间比较采用t检验,多样本间均数比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。结果:(1)Vimentin免疫细胞化学检测:几乎所有第三代细胞胞质内均可见棕黄色颗粒,证明使用胰酶消化至第三代细胞几乎全为肺成纤维细胞;(2)α-SMAmRNA表达:对照组α-SMA mRNA值(0.3850.015)、TGF-β1组(0.615±0.025)、TGF-β1+DAPT组(0.3450.027),其中TGF-β1组α-SMA mRNA值较对照组和TGF-β1+DAPT组明显升高,差异有统计学意义(p<0.05),但对照组较TGF-β1+DAPT组无明显差异,即差异无统计学意义(p>0.05);(3)wnt1mRNA值表达:对照组wnt1mRNA值(0.233±0.005)、TGF-β1组(0.257±0.010)、TGF-β1+DAPT组(0.209±0.016),可知TGF-β1组wnt1mRNA值较对照组和TGF-β1+DAPT组显著升高,差异有统计学意义(p<0.05);(4)β-catenin mRNA和蛋白表达:对照组β-catenin mRNA和蛋白相对吸光光度值(0.984±0.031和0.352±0.023)、TGF-β1组(1.248±0.021和0.431±0.014)、TGF-β1+DAPT组(0.895±0.056和0.102±0.024),可见TGF-β1组较对照组和TGF-β1+DAPT组明显升高,差异有统计学意义(p<0.05)。结论:(1)TGF-β1可诱导肺成纤维细胞转化为肌成纤维细胞,在转化过程中α-SMA、β-catenin、wnt1表达增高;(2)DAPT阻断Notch信号通路后,影响了成纤维细胞表型转化中Wnt/β-catenin信号通路,下调α-SMA、β-catenin、wnt1的mRNA及蛋白表达;(3)Wnt/β-catenin信号通路与Notch信号通路之间可能存在相互关系。