【摘 要】
：
本研究建立了牛地方流行性白血病病毒(BLV)、牛传染性鼻气管炎病毒(BHV1)、牛病毒性腹泻粘膜病毒(BVDV)和赤羽病病毒(AKV)各种病毒单一的PCR检测方法，分别扩增BLV gp51基因341
论文部分内容阅读
本研究建立了牛地方流行性白血病病毒(BLV)、牛传染性鼻气管炎病毒(BHV1)、牛病毒性腹泻粘膜病毒(BVDV)和赤羽病病毒(AKV)各种病毒单一的PCR检测方法，分别扩增BLV gp51基因341bp的片段、BHV1 gB基因478bp的片段、BHV1 gE基因271bp片段、AKV S RNA365bp片段和BVDV的UTR基因289bp的片段。
考虑到BLV通常都以前病毒(DNA病毒)的形式整合于宿主细胞的情况，本研究建立了BLV前病毒和BHV1同步PCR检测方法，同步扩增BLV gp51基因341bp的片段和BHV1 gB基因478bp的片段。
本研究建立了BVDV和AKV两种RNA病毒同步PCR检测方法，分别选取AKV和BVDV特异性引物AKVf1/AKVrl和BVDVf1/BVDVr1，建立两种RNA病毒同步RT-PCR反应体系，可以同步扩增AKV基因的365bp的片段和BVDV的UTR基因289bp的片段。根据BLV高度保守的gp51基因序列分别设计一对引物及其相应的Taqman探针，建立并优化反应体系，该方法与AKV、BVDV、IBR等均无交叉反应，在对已知拷贝数的含BLV质粒的扩增中，其检测灵敏度达到260个拷贝/μL，比用常规PCR对相同模板进行扩增的灵敏度高1000倍。本方法简便、快速，从核酸提取到获得结果只需3h。构建了含牛地方流行性白血病病毒(BLV)、牛传染性鼻气管炎病毒(BHV1)、牛病毒性腹泻粘膜病毒(BVDV)和赤羽病病毒(AKV)四种病毒相关基因的载体质粒作为病毒DNA或RNA阳性对照，研制了牛地方流行性白血病病毒(BLV)、牛传染性鼻气管炎病毒( BHV1)、牛病毒性腹泻粘膜病毒(BVDV)和赤羽病病毒(AKV)各种单一病毒的PCR检测试剂盒，以及BLV前病毒和BHV1二重PCR检测试剂盒和AKV和BVDV单管二重RT-PCR检测试剂盒。对试剂盒的重复性结果表明，各个试剂盒重复性较好，但反复冻融会有所影响，因此推荐开启后尽快一次用完。保存期试验结果表明，试剂盒在-20℃能保存六个月，稳定性较好，能满足实际检测的需求。用建立的PCR检测方法对国内采集和进境奶牛的520份血凝块样品和4份全血样品进行4种病毒检测，检出2头BHV1 gB阳性，1份经ELISA检测为BVDV阳性的样品验证为PCR阳性。编制的SN/T1918-2007《牛传染性鼻气管炎聚合酶链反应操作规程》和SN/T1917-2007《牛地方流行性白血病聚合酶链反应操作规程》已发布。
其他文献
由于喷射混凝土支护具有安全性好、质量高、速度快、省材料和成本低等优点,因此,在国内外井巷施工中得到了普遍应用。当前,在矿山基建井巷工程中有60～80％采用喷射混凝土支护。
摘要： 笔者利用文献资料法，对中国电子竞技运动的诞生、发展、利好、缺陷、竞技的赛制安排以及建议进行了系统的论述。 关键词： 电子竞技 数学体育 虚拟 1.中国电子竞技运动的诞生与发展 1.1电子竞技运动的定义 电子竞技运动就是利用高科技软硬件设备作为运动器械进行的人与人之间的智力对抗运动。通过运动，可以锻炼和提高参与者的思维能力、反应能力、心眼四肢协调能力和意志力，培养团队精神。 1
学好数学对于小学生而言意义重大,然而很多小学生在学习数学时却不够用心,认为数学是一门枯燥乏味的学科.对此,教师应该丰富和发展教学方法,从而能够真正赋予数学课程以内在
随着素质教育的不断发展和新课标理念的不断深化落实,学科教学中全面提升学生综合素质受到越来越多教育工作者的重视.在高中阶段进行英语教学,要提高学生的英语综合素养,在实
随着全民健身计划的深入开展，体育运动逐渐成为人们日常生活的重要组成部分，已经走进大众生活，深入人心。然而，大众体育活动场地严重不足，已影响到人们生活的正常需要及我国群众体育事业的正常发展。据有关部门统计，学校体育场馆的开放率、利用率不高，未能充分发挥应有的教学、健身、休闲、娱乐等功能。学校体育场馆向社会开放，是活化闲置体育设施，充分发挥学校体育场馆的功能，解决大众体育活动场地严重不足的一项重要举措
菌落总数、大肠菌群和致病菌是食品卫生微生物学检测的三项重要指标。产单核细胞李斯特菌(Listeria monocytogenes，Lm)和沙门氏菌(Salmonella)均为最重要的食源性致病菌，其中Lm
喹赛多为喹喔啉类抗菌促生长新药,对猪、牛、鸡等有明显的促生长作用,但目前对其促生长机制还不清楚。本文运用相对定量RT-PCR方法,研究喹赛多对原代培养猪肝细胞以及仔猪肝
摘要： 文章概述了我国目前互联网的现状，阐述了企业门户网站的定义，分析了建立企业门户网站的必要性，并指出了如何建立企业门户网站。 关键词： 互联网 企业门户网站 建立 必要性 一、我国目前互联网的现状 据最新统计数据显示，截至2008年2月底，我国网民数达2.21亿人，超过美国，跃升全球第一。不过另一方面，我国整体互联网普及率仅为16%，低于19.1%的全球平均水平。 互联网的快速
猪内源性反转录病毒(PERV)为反转录病毒科(Retroviridae)哺乳动物C型反转录病毒属(Mammalian Type C Retroviridae)成员，它是以前病毒DNA的形式整合进猪细胞基因组中，并随细胞
摘要： 把多媒体网络技术应用于艺术类学生的英语教学中，不仅强化了语言环境，发挥了学生的主体作用，提高了学生的自主学习能力，而且有利于因材施教，促进英语教师角色的转变。本文就多媒体运用的重要性和影响进行了详细阐述，同时就运用多媒体技术可能带来的挑战进行了探讨。 关键词： 多媒体 网络技术 艺术类学生 英语教学 2008年教育部颁发的《大学英语课程教学要求》中指出：“大学英语是以英语语言知识与