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目的:通过复制牛Ⅱ型胶原诱导型关节炎(collagen 2 inducedarthritis,CIA)模型,观察大鼠用药过程中体重、关节炎指数变化及龙蚁清风合剂(以后简称LYQF)对CIA大鼠血清肿瘤坏死因子α(tumornecrosis factor-α,TNF-α)、白介素1(interleukin-1,IL-1)、白介素10(interleukin-10,IL-10)表达的影响,进一步探讨龙蚁清风合剂治疗类风湿关节炎的疗效及可能的作用机理。
方法:①50只Wistar大鼠,雌性,体重(110±10)g,随机选取10只为正常对照组,其余40只采用牛Ⅱ型胶原蛋白与等体积弗氏不完全佐剂(1mg·mL-1)混合、震荡充分乳化,制成Ⅱ型胶原诱导型关节炎模型,试验时于每只大鼠颈、背部多点皮内注射致炎,于第14天后按上述方法和剂量行再次免疫。免疫造模成功后将大鼠随机分为4组:模型对照组9只;甲氨喋呤组10只;龙蚁清风合剂高、低剂量组各9只。正常对照组,自由饮水;模型组,生理盐水20ml/kg灌胃,每日1次;甲氨喋呤组灌服甲氨喋呤药液1.23mg/Kg(为60Kg成人临床用药换算得出),每周一次;龙蚁清风合剂高剂量组(含生药1.92g/ml,用药剂量为临床常用量的2倍量)、低剂量组(含生药0.48g/ml,用药剂量为临床常用量的0.5倍量),分别以相应浓度龙蚁清风合剂20ml/Kg给药,每日分2次灌胃,共35天。②采用放射酶连免疫法检测各组大鼠血清TNF-α、IL-1 IL-10水平的表达。③采用SPSS16.0对结果进行统计分析,所有数据以(x)±s表示,不同组间用方差分析及t检验。
结果:①治疗4周后,3组用药大鼠(龙蚁清风高、龙蚁清风低、甲氨蝶呤组)大鼠关节红点、红斑症状减轻,一般情况及关节肿胀程度与模型组比较无明显改变,5周后观察到关节红肿及皮肤充血发亮症状均减轻,趾尖出血点颜色变浅变淡,大鼠一般情况改善。②前3周治疗后各治疗组大鼠体重增长与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05),各治疗组治疗3周后体重增长与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。同时,观察发现治疗4周后,龙蚁清风高剂量组与甲氨喋呤组比较大鼠体重增加明显,差异有统计学意义(P<0.05)。③模型大鼠AI积分在疫苗接种后7-9天出现,25天左右达到高峰,32天后呈现下降趋势;每次两个星期治疗组大鼠AI积分与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05);经过4个星期的治疗,治疗组大鼠AI积分显着改善,与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.05),龙蚁清风治疗5周后,高剂量组和甲氨喋呤组AI得分下降更明显,龙蚁清风低剂量组,差异有统计学意义(P<0.05)。④CIA模型大鼠药物治疗5周后,三组用药组均能明显降低血清TNF-α、IL-1的水平,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.01);三个用药组均能升高IL-10的水平,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。同时研究结果表明,龙蚁清风高剂量组在降低TNF-α、IL-1的水平,升高IL-10的水平方面,与甲氨喋呤组比较,差异有统计学意义(P<0.01);龙蚁清风高剂量组在降低TNF-α、IL-1的水平方面,与龙蚁清风低剂量组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。
结论:①LYQF能减轻CIA模型大鼠关节肿胀程度。②LYQF在增加CIA模型大鼠体重方面比甲氨喋呤效果明显。③LYQF能降低CIA模型大鼠AI积分,在降低CIA模型大鼠AI积分方面不及甲氨喋呤效果明显。④LYQF能降低CIA大鼠血清TNF-α、IL-1水平,升高CIA大鼠血清IL-10的水平,减轻关节炎症状。LYQF高剂量组在降低CIA大鼠血清TNF-α、IL-1水平,升高CIA大鼠血清IL-10水平方面比甲氨喋呤效果明显。