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目的:研究大鼠肝脏缺血再灌注损伤后Mrp2、Mrp3表达及定位的改变,探讨肝缺血再灌注后发生高胆红素血症的分子机制。方法:健康的雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为两组:①假手术对照组(Sham组),即进腹后仅解剖肝门,不做肝门阻断。②缺血再灌注组(IR组),开腹后游离肝周韧带,显露肝十二指肠韧带,用小儿沙式钳夹闭第一肝门,造成门静脉、肝动脉和胆总管的完全阻断,阻断持续30min后,恢复入肝血流。两组大鼠分别于再灌注后1h、6h、1d和3d开腹取材和指标检测,应用全自动生化分析仪检测血清ALT、DBIL含量及胆汁中DBIL的含量,应用HE染色方法分析两组肝组织病理学改变,采用免疫组化法和RT-PCR技术,分析两组大鼠肝细胞毛细胆管膜上Mrp2与基底膜上Mrp3的表达及定位情况。结果:①病理学改变:Sham组各时点肝细胞未见明显异常;IR组再灌注后肝组织炎症反应较轻,以再灌注后6h最为明显,汇管区可见少量的中性粒细胞浸润,肝细胞胞质疏松、水肿,但无肝细胞坏死的发生。②血浆中ALT、DBIL及胆汁中DBIL含量:IR组再灌注后1h~1d,血浆ALT、DBIL的含量迅速升高以及胆汁DBIL的含量迅速下降,与相应时点Sham组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。再灌注后3d,IR组血浆ALT、DBIL以及胆汁DBIL的含量恢复正常,与同时点Sham组比较无统计学差异(P>0.05)。③两组大鼠肝组织Mrp2、Mrp3mRNA的表达:IR组Mrp2mRNA表达的明显下调发生于再灌注后的1h和6h,与相应时点Sham组比较差异具有统计学意义(P<0.05),再灌注后1d和3d IR组Mrp2mRNA表达量与相应时点Sham组比较无明显差异(P>0.05);IR组Mrp3mRNA表达的明显上调发生于再灌注后的1h~1d,与相应时点Sham组比较差异具有统计学意义(P<0.05),再灌注后3d IR组Mrp3mRNA表达量与同时点Sham组比较无明显差异(P>0.05)。④两组大鼠肝组织Mrp2、Mrp3蛋白免疫组织化学染色的分析:(1)两组大鼠肝组织Mrp2蛋白的表达及定位:Sham组Mrp2蛋白在肝细胞毛细胆管膜上规则表达,胞浆内未见明显棕黄染色。IR组再灌注后的1h和6h,Mrp2蛋白在毛细胆管膜上染色稀疏,与Sham组相应时点比较表达明显减少(P<0.05),且胞浆内可见明显棕黄染色;再灌注后1d和3d,Mrp2蛋白的表达与相应时点Sham组比较未见减少(P>0.05),但在毛细胆管膜下可见许多棕黄色“囊泡”聚集,以再灌注后1d最为明显;再灌注后3d,聚集于毛细胆管膜下的“囊泡”大部分已重新融合定位到毛细胆管膜上。(2)肝组织Mrp3蛋白的表达及定位:Sham组及IR组再灌注后3d,Mrp3蛋白在肝细胞基底膜上几乎不表达;IR组再灌注后1h~1d,Mrp3蛋白在基底膜上明显着色,表达量与相应时点Sham组比较明显增加(P<0.05)。结论:①大鼠全肝血流阻断30min再灌注模型可成功诱导高胆红素血症的发生。②Mrp2的表达减少和定位异常以及Mrp3的表达增加共同导致了大鼠肝缺血再灌注损伤后高胆红素血症的发生。