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背景及目的：在高血压、心肌梗死、心脏瓣膜病及扩张型心肌病等各种病理状态致心脏负荷增加时心脏发生肥大反应。在细胞水平,心脏肥大的标志是细胞面积增加,蛋白合成增多,及一系列只在出生前心脏中表达的心脏胚胎基因再次激活。有关调节心肌肥大的分子机制至今仍为充分阐明。本实验用AngⅡ刺激诱导心肌细胞肥大,研究EPO在体外对心肌细胞肥大的作用,并尝试解释TGF-B1-TAK1-p38MAPK在其中的作用。方法：1、分离培养新生乳鼠心肌细胞并鉴定：①取新生乳鼠心室肌组织后,以0.1%胰蛋白酶及0.5g/LⅡ型胶原蛋白酶复合消化分离心肌细胞,差速贴壁45min分离纯化心肌细胞,加入100umol/L Brdu抑制非心肌细胞的生长以提高心肌细胞纯度。②观察培养心肌细胞的活性并进行细胞鉴定。2、取分离培养的心肌细胞随机分为Control组、EPO组、AngⅡ组、AngⅡ+EPO组、AngⅡ+EPO+SB203580组5组分别加入EPO(20U/ml)、SB203580(15umol/L) AngⅡ(1×10-6mol/L)培养。3、心肌细胞肥大的检测：软件计算心肌细胞表面积,[3H]-亮氨酸渗入测定蛋白合成,PCR检测心胚标志基因ANF及β-MHC的mRNA表达。4、实时荧光定量PCR (RT-Q-PCR)检测转化生长因子β1(TGF-B1)及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在核酸水平的表达。5、Western blot检测信号蛋白TGF-β1、转化生长因子激活性激酶1(TAK1)、 Phospho-TAK1、p38MAPK及Phospho-p38MAPK表达。结果：1、心肌细胞培养4-6h开始贴壁生长。细胞开始呈圆形,后变为梭形、星形、多边形等形态。培养24h细胞基本贴壁,部分心肌细胞开始出现单个细胞自发性搏动；培养72h后细胞伸出的伪足相互接触交织成网,逐渐形成细胞簇,搏动呈同步性。经免疫细胞化学染色鉴定a-肌动蛋白(a-actin)抗体阳性证实为心肌细胞。2、心肌细胞肥大检测：EPO可抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,包括降低其诱导的心肌细胞表面积增加、蛋白合成增加及心胚基因ANF及β-MHC表达；而在EPO基础上加入SB203580可是这一作用加强(p值均<0.05)。3.TGF-β1及p38MAPK的mRNA表达:AngⅡ刺激心肌细胞内TGF-β1及p38MAPK的mRNA表达增加,加入EPO及EPO+SB203580后可减弱AngⅡ的这一作用(p值均<0.05)。4、信号蛋白TGF-β1、TAK1、Phospho-TAK1、p38MAPK及Phospho-p38MAPK的表达：经AngⅡ刺激后心肌细胞内TGF-β1、TAK1、Phospho-TAK1、p38MAPK及Phospho-p38MAPK蛋白表达均增加,加入EPO及EPO+SB203580后可减弱这一作用(p值均<0.05)。结论：EPO可显著抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,且同时伴TGF-β1-TAK1-p38MAPK通路的活性抑制,这说明EPO抗心肌肥大可能与TGF-β1-TAK1-p38MAPK信号通路相关。