【摘 要】
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作为一种普遍存在的不可逆蛋白质修饰,N-末端乙酰化修饰（N-terminal acetylation,NTA）影响目标蛋白的稳态、折叠、定位和功能等,并最终影响生物体正常生长发育、胁迫响应。介导NTA的N-末端乙酰转移酶（N-terminal acetyltransferases,Nats）一般由催化亚基和辅助亚基组成。迄今已发现了8种Nats,即Nat A～Nat H。其中,研究较多、了解较深入
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作为一种普遍存在的不可逆蛋白质修饰,N-末端乙酰化修饰（N-terminal acetylation,NTA）影响目标蛋白的稳态、折叠、定位和功能等,并最终影响生物体正常生长发育、胁迫响应。介导NTA的N-末端乙酰转移酶（N-terminal acetyltransferases,Nats）一般由催化亚基和辅助亚基组成。迄今已发现了8种Nats,即Nat A～Nat H。其中,研究较多、了解较深入是Nat A、NatB和Nat C。人们对NTA的研究主要集中在动物和酵母上,植物中研究较少。据报道,近80%的拟南芥蛋白发生NTA,但尚未有NTA参与生长素生物合成调控的报道。本实验室前期筛选到一株拟南芥突变体ckrc3（Cytokinin induced Root Curling 3）,该突变体有典型的生长素缺陷表型,此表型起源于NatB辅助亚基基因的功能突变。根据NatB特征识别序列,对YUC8作为NatB的底物对生长素稳态的影响进行研究。具体结果如下:（1）GUS染色表明NatB催化亚基NBC-1与辅助亚基CKRC3有相似和广泛的组织定位,包括子叶、顶端分生组织、下胚轴及根等部位。（2）与野生背景下过表达YUC8表现出典型的高生长素表型不同相比,NatB突变导致高生长素表型消失,并且体外实验检测到YUC8可以被NatB催化亚基NBC-1催化。（3）NatB底物识别特异性依赖于底物蛋白第二位氨基酸,故而我们构建了包含野生YUC8及其N-末端相关序列突变基因YUC8（MA）、YUC8（MW）和YUC8（MP）的过表达载体,导入yuc8背景中发现野生型YUC8的过表达引起拟南芥明显的高生长素表型,而上述YUC8突变体的过表达并未导致高生长素表型,说明N-末端第二位氨基酸在YUC8的NTA修饰中的重要性。（4）我们利用体外乙酰化和HPLC-MS验证了具有NatB识别序列的YUC1、YUC2、YUC5、YUC6、YUC9能被NatB催化亚基NBC-1催化,然而没有NatB识别序列的YUC3未检测到NTA,表明其它具有NatB识别序列的YUC也可以是NatB的底物。综上所述,NatB介导YUCCAs的NTA,以及NatB介导的NTA对YUC8起稳定作用,从而调控生长素稳态,揭示了全新的生长素调控机制。
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