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目的:“薏苡附子败酱散”出自汉代张仲景《金匮要略》用于治疗“肠痈”的经典方剂,由薏苡仁、附子、败酱草三味药组成。本课题以薏苡附子败酱散为研究对象,应用现代药理学及化学分析方法,进行全方及其拆方药效、制备工艺、质量标准及其成型制剂浓缩丸的药效等研究,为将该经典名方开发成一种治疗溃疡性结肠炎的现代新型制剂提供实验依据。方法:1处方筛选研究:采用葡聚糖硫酸钠（DSS）自由饮方式诱导Balb/c小鼠溃疡性结肠炎（UC）动物模型,即取雄性BALB/c小鼠,按体重随机分为空白组、模型组、美沙拉嗪（5-ASA）组、全方组、薏附组、薏酱组及附酱组,每组14只,给药5 d后,除空白组外其余各组均给予小鼠自由饮用5.%DSS水溶液7 d造成UC模型,空白组给予饮用纯化水,每日记录小鼠体质量、粪便性状及便血情况,对其疾病活动指数（DAI）进行评分;采用酶联免疫法（ELISA）检测结肠组织MPO及IL-1β表达水平;采用流式液相多重蛋白定量技术检测血清中IL-6及TNF-α表达水平;采用HE染色观察结肠组织病理学变化,并给予组织病理学评分。2制备工艺研究:2.1提取工艺研究:采用单因素试验,对加水量、提取时间、提取次数3个因素分别进行考察,再结合正交设计试验L9（34）,以原儿茶酸、绿原酸、苯甲酰新乌头原碱提取率及得膏率为综合评价指标,优选最佳水提工艺。2.2成型工艺研究:对药粉比例、药粉细度及浓缩浸膏相对密度进行考察。3制剂质量标准研究:采用薄层色谱法（TLC）对薏苡附子败酱浓缩丸中薏苡仁、败酱草及黑顺片进行定性鉴别;对制剂中水分、重量差异、崩解时限及乌头碱限量进行检查;采用高效液相色谱法（HPLC）对薏苡附子败酱浓缩丸中原儿茶酸及绿原酸进行含量测定。4药效学评价:取雄性SD大鼠,按体重随机分为空白组、模型组、美沙拉嗪（5-ASA）组、丸剂高、中、低剂量组共6个组,每组14只,除空白组外其余5组均给予5%DSS自由饮用造模,连续饮用8 d,空白组给予饮用纯化水,每日记录大鼠体质量、粪便性状及便血情况,并对其疾病活动指数（DAI）进行评分;采用酶联免疫法（ELISA）检测结肠组织IL-1β、MPO及血清中IL-6、TNF-α的表达水平;采用全自动血液分析仪测定白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、血红蛋白浓度（Hb）、血小板数（PLT）、血小板压积（PCT）占比等血常规相关指标以及测定血清CRP含量及ESR沉降速率;采用HE染色观察结肠组织病理学变化,给予组织病理学评分。5急性毒性实验研究:取40只KM种小鼠,雌雄各半,按体重随机分为空白组及浓缩丸给药组共两组,每组20只,采用最大给药量法灌胃（ig）给予浓缩丸组小鼠以薏苡附子败酱浓缩丸水溶液,给药体积为30 mL/10 g,给药1 d,1 d内给药两次,给药时间间隔6 h,空白组给予等体积纯化水,每日观察记录小鼠一般行为表现及死亡情况,每2 d称量记录小鼠体重,实验周期为14 d。采用HE染色观察小鼠心、肝、脾、肺及肾脏组织病理学变化,初步评价其急性毒性。结果:1处方筛选研究:薏苡附子败酱散全方及其拆方水提液对DSS诱导的UC均具有一定治疗效果,与模型组比较,全方组、薏附及附酱组的DAI评分、MPO、IL-1β表达水平均显著降低（P＜0.05或P＜0.01）;全方组、薏附组IL-6表达显著降低（P＜0.05）;全方及薏酱组TNF-α表达水平显著降低（P＜0.05）;而全方组及附酱组结肠长度显著升高（P＜0.05或P＜0.01）;病理评分结果显示,全方及拆方各组的病理评分均较模型组显著降低（P＜0.05）。2制备工艺研究:2.1提取工艺研究:根据综合评分结果并结合实际成本考虑:单因素试验选定加水量为:8、10、12倍;提取时间:0.5、1、1.5 h;提取次数:1、2、3次进行进一步正交设计试验,而正交试验方差分析表明加水量、提取时间对提取工艺均无显著性影响（P＞0.05）,而提取次数对提取工艺有显著性影响（P＜0.05）,综合评分表明薏苡附子败酱浓缩丸最佳提取工艺为:加12倍量水,提取3次,每次0.5 h;验证实验结果表明,3次重复实验综合评分平均值为86.40,RSD值为:2.09%。2.2成型工艺研究:确定的药粉比例为1/3处方量薏苡仁打粉,细粉过80目筛,水提浸膏浓缩至相对密度1.08～1.15（60～70℃）。3质量标准研究:采用TLC对浓缩丸中薏苡仁、败酱草及黑顺片进行定性鉴别,并对黑顺片的乌头碱进行限量检查。其中,薏苡仁的甘油三油酸酯、败酱草的原儿茶酸及黑顺片的苯甲酰新乌头原碱在与对照药材、对照品色谱相应位置上,三批样品均显示相同颜色斑点,且阴性样品在相同的位置无干扰;对浓缩丸的水分、重量差异进行检查,结果均符合规定;乌头碱限量检查结果表明,黑顺片的乌头碱、次乌头碱、新乌头碱在与对照品色谱相应位置上,没有出现明显斑点;采用HPLC对浓缩丸中的原儿茶酸及绿原酸进行含量测定分析,色谱条件:色谱柱:Ulitmate XB-C18（250×4.6 mm,5μm）,以乙腈-0.1%磷酸（8:92）为流动相,检测波长:260 nm、327 nm,流速1 mL/min,进样量为10μL,柱温30℃;分析结果表明,原儿茶酸和绿原酸均在0.01～0.16 mg/mL范围内呈现良好的线性关系;原儿茶酸平均加样回收率为103.33%,RSD为0.43%;绿原酸平均加样回收率为101.47%,RSD为0.62%。4药效学研究:药效学动物实验结果表明,本制剂对DSS诱导的大鼠UC具有一定的治疗效果。与模型组比较,丸高组能够明显抑制UC导致的体重下降（P＜0.05）,丸高、中剂量组能够降低DAI评分（P＜0.01）;对于炎症因子,与模型组比较,丸高、中组能够降低TNF-α、MPO表达量（P＜0.05或P＜0.01）,丸高剂量组能够降低IL-6及IL-1β表达量（P＜0.05或P＜0.01）;对于临床相关指标,与模型组比较,丸高、中剂量组能够升高血液中ESR沉降速率（P＜0.05）,丸高组能够降低血液中CRP、白细胞、血小板数量及血小板压积占比（P＜0.01或P＜0.05）,提高红细胞及血红蛋白表达数量（P＜0.05）;病理切片结果表明,薏苡附子败酱浓缩丸在一定程度上可缓解DSS诱导所致的结肠组织炎细胞大量浸润、杯状细胞消失等病理现象;病理评分结果表明,丸高组病理评分较模型组显著降低（P＜0.01）。5急性毒性试验:按最大给药量法（总剂量37.8 g/kg,相当于人体正常用量的210倍）经口灌胃KM种小鼠以浓缩丸水溶液,小鼠均未出现中毒现象及死亡情况,连续观察14 d,与空白组比较,丸剂组动物体重、脏器指数无统计学意义（P＞0.05）,且其主要脏器结构图肉眼下观察未见明显异常;光学显微镜下观察各组织病理病变情况,与空白对照组比较,未观察到明显的病理现象,且各组织细胞形态与空白组比较均无明显区别。结论:1本研究经全方及各拆方组药效比较证明:以全方组较各拆方组疗效更好。2本研究优选出的薏苡附子败酱浓缩丸最佳提取工艺为:加12倍量水,提取3次,每次0.5 h;最佳成型工艺为:药粉比例为1/3处方量薏苡仁打粉,细粉过80目筛,水提浸膏浓缩至相对密度1.08～1.15（60～70℃）。3本研究采用TLC建立了浓缩丸中薏苡仁、黑顺片及败酱草药材的定性鉴别方法及浓缩丸中乌头碱限量检查法;其中,薏苡仁药材以甘油三油酸酯作为参照,展开条件:石油醚（60～90℃）-乙醚-甲酸（4.4:1.8:0.2）;黑顺片药材以苯甲酰新乌头原碱作为参照,展开条件:正己烷-乙酸乙酯-甲醇（6:4:1.5）;败酱草药材以原儿茶酸作为参照,展开条件:氯仿-乙酸乙酯-丙酮-甲酸（6:2.5:2.5:0.2）;乌头碱限量检查以乌头碱、新乌头碱、次乌头碱作为参照,展开条件:正己烷-乙酸乙酯-甲醇（6.4:3.6:1.5）。采用HPLC建立浓缩丸中原儿茶酸及绿原酸含量测定方法,以乙腈-0.1%磷酸（8:92）为流动相,测得连续3批浓缩丸的原儿茶酸及绿原酸含量范围为:0.4301～0.4985 mg/g,0.5383～0.6203 mg/g。4本研究初步证明,薏苡附子败酱浓缩丸可通过延缓模型所致体重下降及结肠长度缩短,改善腹泻便血情况,降低血清及结肠组织中炎症因子表达量;在升高血红蛋白及红细胞数量的同时,能够降低CRP、白细胞、血小板及血小板压积表达;缓解结肠炎模型所致的炎性细胞浸润及保护结肠上皮细胞,因而对溃疡性结肠炎具有良好的治疗效果。5本研究急性毒性试验初步证明,在37.8 g/kg总剂量下,薏苡附子败酱浓缩丸对正常小鼠体重无明显影响,且其组织器官未见明显损伤。