CAPRI细胞与CIK细胞体外增殖、杀伤活性和分泌功能的研究

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目的:对比研究链式激活的免疫(CAPRI)细胞和细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞的细胞形态、增殖活性、对肿瘤细胞的杀伤活性及分泌细胞因子的情况,以探讨两种免疫细胞体外抗肿瘤作用的差别。方法:分别抽取3名健康志愿者外周血50ml,用淋巴细胞分层液分离出3份单个核细胞(PBMC)悬液,均调整细胞浓度为1×106/ml,每份细胞悬液平均分为两部分,一部分经过多种细胞因子诱导、扩增、培养得到CAPRI细胞,另一部分经IFN-γ、IL-2和CD3单克隆抗体等细胞因子共同诱导收获CIK细胞,培养过程中动态检测CAPRI细胞和CIK细胞的增殖能力及活性,并在培养过程中观察细胞形态变化情况,培养至14天时进行实验检测:1.用台盼蓝染色对细胞活性进行检测;2.细胞计数,绘出生长曲线,研究增殖活性;3.用LDH释放法分别检测两种细胞对白血病K562细胞、乳腺癌MCF-7细胞的杀伤活性;4.应用ELISPOT技术检测两种细胞分泌IFN-γ、IL-2的水平。结果:1.CAPRI细胞组在培养至第5天、第14天检测的细胞数为(3.61±1.16)×107、(6.32±1.23)×107均低于CIK细胞组细胞数(10.39±4.24)×107、(60.21±6.08)×107(P<0.001/P<0.001),且两种细胞活性均大于95%;2.CAPRI细胞组对白血病K562细胞的杀伤活性在效靶比40:1、20:1时分别为(55.1±3.25)%、(35.0±2.65)%,均低于CIK细胞组(60.0±3.03)%、(39.7±3.42)%(P=0.004/0.005),CAPRI细胞组对乳腺癌MCF-7细胞的杀伤活性在效靶比40:1、20:1、10:1时分别为(71.5±3.06)%、(56.0±3.76)%、(40.2±2.90)%,均高于CIK细胞组(65.4±3.86)%、(49.5±3.91)%、(36.1±3.73)%(P=0.002/0.003/0.02);3.CAPRI细胞与CIK细胞在1×106/ml、5×105/ml两个不同细胞浓度下应用ELISPOT技术检测,CAPRI细胞组ELISPOT检测的IFN-γ的斑点数分别为(126.2±10.31)、(48.8±10.99),均低于CIK细胞组(409.3±7.76)、(159.3±15.45)(P<0.001/P<0.001),CAPRI细胞组IL-2的斑点数为(325.1±16.24)、(113.8±11.29)均高于CIK细胞组(212.0±16.58)、(70.7±10.57)(P<0.001/P<0.001)。结论:1.CAPRI细胞的增殖能力低于CIK细胞;2.CAPRI细胞对NK靶细胞白血病K562细胞的杀伤活性低于CIK细胞,而对NK非敏感的实体瘤乳腺癌MCF-7细胞的杀伤活性高于CIK细胞;3.CAPRI细胞分泌IFN-γ的水平低于CIK细胞,分泌IL-2的水平高于CIK细胞。4.CAPRI细胞和CIK细胞在增殖、杀伤活性以及分泌细胞因子方面有差异,两种免疫细胞抗肿瘤机制存在区别。
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