论文部分内容阅读
目的：弥漫性肺间质疾病(interstitial lung disease，ILD)是以肺泡壁为主并包括肺泡周围组织及其相邻支撑结构发生病变的一组疾病，以慢性炎症和间质纤维化为主要病理特征。其中最常见的类型为特发性肺间质纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis，IPF)，IPF的病因未明，在肺部引起的病变范围较为弥漫，特征典型。组织病理学上表现为寻常性间质性肺炎，临床表现为渐进性的劳力性气促，肺功能表现为进行性限制性通气功能障碍和弥散量的减少，随病情进展最终可导致呼吸衰竭而死亡。目前ILD的临床治疗效果欠佳，病死率高。因此研究治疗ILD的新方法就变得尤为重要。沙利度胺具有抗炎、免疫调节和抗血管生成的作用。目前已经证实沙利度胺能够减轻大鼠中博来霉素诱导的纤维化，其明确的作用机制尚不清楚。文献报道，在实验性肺损伤动物模型中，肺损伤后纤维化的减弱伴有血管内皮生长因子(VEGF)表达的降低，提示抑制新生血管生成可能是其作用机制，同时动物模型中白介素-6(IL-6)的表达也减少，提示沙利度胺可能存在多种作用方式抑制了肺损伤后纤维化的进程。
本实验旨在通过测量血清中白介素1(IL-1)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor，CTGF)的含量以及肺组织Ⅰ型胶原蛋白的表达水平，研究沙利度胺、地塞米松对博来霉素致大鼠纤维化的干预作用，探讨沙利度胺可能的作用机制。
方法：选取清洁级健康、SD雄性大鼠120只，由河北医科大学实验动物中心提供，体重210±10g，适应性饲养一周后，随机分为四组：(1)盐水组(A组对照组)：30只，各时间点10只，一次性向气管内注入0.1ml/100g生理盐水，于假造模后第1日用生理盐水灌胃(1ml/100g)，1次/d，分别于7天、14天、28天各处死10只；(2)博来霉素组(模型组B组)：30只，各时间点10只，一次性向气管内注入博来霉素A5(5mg/kg)，于造模后第1日用生理盐水灌胃(1ml/100g)，1次/d，分别于7天、14天、28天各处死8只、10只、8只；(3)沙利度胺干预组(C组)：30只，各时间点10只，一次性向气管内注入博来霉素A5(5mg/kg)，于造模后第1日用生理盐水灌胃(1ml/100g)，1次/d，分别于7天、14天、28天各处死8只、10只、8只；(4)地塞米松干预组(D组)：各组大鼠均小心剪断其双侧股动脉，放血处死，并收集血液，利用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测离心血清中白介素1、CTGF(connective tissue growth factor，结缔组织生长因子)的浓度。取下大鼠右肺下叶，于4％多聚甲醛溶液中固定，用免疫组织化学法检测Ⅰ型胶原的表达，测量并记录每个视野阳性染色的平均积分光密度(IOD)值。通过Masson胶原染色和HE染色，间接评价肺纤维化及肺泡炎的严重程度，并采用Szapiel法分为4个等级。采用SPSS13.0统计学软件处理所得实验数据。
结果：
1肺组织病理分析结果
相同时间点对比，模型组肺泡炎、肺纤维化的程度明显高于对照组，7、14、28天时有显著差异(P<0.01)，说明此次造模成功；
沙利度胺组：肺泡炎和纤维化严重程度均较模型组减轻：相同时间点相比，地塞米松组肺泡炎程度和模型组相比，有显著性差异(P<0.01)；相同时间点纤维化程度和模型组相比，有统计学意义(P<0.05)。
地塞米松组：肺泡炎和纤维化严重程度均较模型组减轻：各相同时间点，地塞米松组肺泡炎严重程度较模型组明显降低(P<0.05)；纤维化程度较模型组明显减轻，有显著性差异(P<0.05)；
各相同时间点，地塞米松与沙利度胺组的肺泡炎和纤维化程度均无统计学意义(P>0.05)。
2肺组织Ⅰ型胶原蛋白含量变化
模型组大鼠肺组织Ⅰ型胶原蛋白含量随造模时间延长逐渐升高，28天达高峰。7天、14天、28天模型组与对照组、沙利度胺组、地塞米松组相比，Ⅰ型胶原蛋白含量明显增高(P<0.01)；沙利度胺组、地塞米松组大鼠Ⅰ型胶原蛋白含量呈低水平升高趋势，造模后各时间点Ⅰ型胶原蛋白含量均高于对照组(P<0.05)；但沙利度胺组、地塞米松组之间差异无统计学意义(P>0.05)。
3血清中CTGF含量变化
模型组大鼠血清中CTGF的表达量均明显高于对照组、沙利度胺干预组和地塞米松干预组，具有统计学意义。(除第7天与地塞米松组相比P<0.05，其余各组P<0.01。沙利度胺组干预组与地塞米松组干预组相比，7天14天P>0.05，28天P<0.05，有统计学意义。
4血清中白介素1含量变化
28天时，沙利度胺组干预组与模型组相比，白介素1的含量下降，有统计学意义(P<0.05)，与对照组相比，含量升高，有统计学意义(P<0.05)，沙利度胺组与地塞米松组相比，在7天、14天、28天均无明显差异。
结论：
1沙利度胺能减轻博来霉素所致大鼠纤维化程度，减轻肺间质Ⅰ型胶原蛋白的沉积，说明沙利度胺对博来霉素所致大鼠肺纤维化具有一定的治疗作用。
2沙利度胺在博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化模型中具有与地塞米松相似的抗纤维化作用，其机制可能是通过抑制白介素1、结缔组织生长因子的表达，从而减轻早期的炎症反应，最终抑制肺纤维化进程。
本实验旨在通过测量血清中白介素1(IL-1)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor，CTGF)的含量以及肺组织Ⅰ型胶原蛋白的表达水平，研究沙利度胺、地塞米松对博来霉素致大鼠纤维化的干预作用，探讨沙利度胺可能的作用机制。
方法：选取清洁级健康、SD雄性大鼠120只，由河北医科大学实验动物中心提供，体重210±10g，适应性饲养一周后，随机分为四组：(1)盐水组(A组对照组)：30只，各时间点10只，一次性向气管内注入0.1ml/100g生理盐水，于假造模后第1日用生理盐水灌胃(1ml/100g)，1次/d，分别于7天、14天、28天各处死10只；(2)博来霉素组(模型组B组)：30只，各时间点10只，一次性向气管内注入博来霉素A5(5mg/kg)，于造模后第1日用生理盐水灌胃(1ml/100g)，1次/d，分别于7天、14天、28天各处死8只、10只、8只；(3)沙利度胺干预组(C组)：30只，各时间点10只，一次性向气管内注入博来霉素A5(5mg/kg)，于造模后第1日用生理盐水灌胃(1ml/100g)，1次/d，分别于7天、14天、28天各处死8只、10只、8只；(4)地塞米松干预组(D组)：各组大鼠均小心剪断其双侧股动脉，放血处死，并收集血液，利用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测离心血清中白介素1、CTGF(connective tissue growth factor，结缔组织生长因子)的浓度。取下大鼠右肺下叶，于4％多聚甲醛溶液中固定，用免疫组织化学法检测Ⅰ型胶原的表达，测量并记录每个视野阳性染色的平均积分光密度(IOD)值。通过Masson胶原染色和HE染色，间接评价肺纤维化及肺泡炎的严重程度，并采用Szapiel法分为4个等级。采用SPSS13.0统计学软件处理所得实验数据。
结果：
1肺组织病理分析结果
相同时间点对比，模型组肺泡炎、肺纤维化的程度明显高于对照组，7、14、28天时有显著差异(P<0.01)，说明此次造模成功；
沙利度胺组：肺泡炎和纤维化严重程度均较模型组减轻：相同时间点相比，地塞米松组肺泡炎程度和模型组相比，有显著性差异(P<0.01)；相同时间点纤维化程度和模型组相比，有统计学意义(P<0.05)。
地塞米松组：肺泡炎和纤维化严重程度均较模型组减轻：各相同时间点，地塞米松组肺泡炎严重程度较模型组明显降低(P<0.05)；纤维化程度较模型组明显减轻，有显著性差异(P<0.05)；
各相同时间点，地塞米松与沙利度胺组的肺泡炎和纤维化程度均无统计学意义(P>0.05)。
2肺组织Ⅰ型胶原蛋白含量变化
模型组大鼠肺组织Ⅰ型胶原蛋白含量随造模时间延长逐渐升高，28天达高峰。7天、14天、28天模型组与对照组、沙利度胺组、地塞米松组相比，Ⅰ型胶原蛋白含量明显增高(P<0.01)；沙利度胺组、地塞米松组大鼠Ⅰ型胶原蛋白含量呈低水平升高趋势，造模后各时间点Ⅰ型胶原蛋白含量均高于对照组(P<0.05)；但沙利度胺组、地塞米松组之间差异无统计学意义(P>0.05)。
3血清中CTGF含量变化
模型组大鼠血清中CTGF的表达量均明显高于对照组、沙利度胺干预组和地塞米松干预组，具有统计学意义。(除第7天与地塞米松组相比P<0.05，其余各组P<0.01。沙利度胺组干预组与地塞米松组干预组相比，7天14天P>0.05，28天P<0.05，有统计学意义。
4血清中白介素1含量变化
28天时，沙利度胺组干预组与模型组相比，白介素1的含量下降，有统计学意义(P<0.05)，与对照组相比，含量升高，有统计学意义(P<0.05)，沙利度胺组与地塞米松组相比，在7天、14天、28天均无明显差异。
结论：
1沙利度胺能减轻博来霉素所致大鼠纤维化程度，减轻肺间质Ⅰ型胶原蛋白的沉积，说明沙利度胺对博来霉素所致大鼠肺纤维化具有一定的治疗作用。
2沙利度胺在博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化模型中具有与地塞米松相似的抗纤维化作用，其机制可能是通过抑制白介素1、结缔组织生长因子的表达，从而减轻早期的炎症反应，最终抑制肺纤维化进程。