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肺癌是当今世界上最常见和病死率极高的恶性肿瘤之一,极易发生肝、骨和脑转移,甚至有些病人在肺癌的早期就发生远距离转移。因而导致了肺癌的治愈率仅为13%。因此,研究肿瘤细胞的浸润和转移过程,筛选并确认与肺癌转移相关的标志蛋白和功能蛋白,揭示它们在肺癌转移过程中的动态变化,将有利于进一步阐明肺癌转移的分子机理,为临床治疗提供新的视角。
CABYR是Soren等于2002年在精子中发现的一种钙结合的酪氨酸磷酸化调节蛋白,其基因定位于,18q11.2。CABYR有2个编码区-CR-A和CR-B,编码5种异构体(CABYR-a,b,c,d,e)。其中,CABYR-a,b有钙结合的能力,且CABYR-a限制性的表达与睾丸和一些肿瘤细胞中,如A549、NCI-H446等;CABYR-c和CABYR-d则可广泛在人睾丸、脑、肺、胰腺、胎儿脑以及一些癌细胞系中表达,但关于CABYR在肿瘤中的生物学作用的研究目前未见任何报道。
本实验室在前期工作中采用DDRT-PCR对具有不同转移能力的系列肺癌细胞株进行差异基因筛选时,发现CABYR在低转移能力的CL1-0细胞中表达量明显高于高转移能力的CL1-5细胞,后续实验证明了CABYR是一种新的肺癌特异的CT抗原。为了探究CABYR是否在其他肿瘤组织中也有表达,首先通过自制的抗体采用免疫组织化学方法对卵巢癌、胃癌、结肠癌、食道癌等癌症及其癌旁组织进行了CABYR检测,初步结果显示CABYR在上述组织中可广泛表达,但肿瘤组织与其癌旁的表达无显著性差异。因此本论文着重探讨了CABYR-a在肺癌发生和发展中的生物学作用及分子机理。
首先将CABYR-a导入低表达CABYR的肺癌细胞LTEP-a-2,在高表达CABYR-a的A549细胞中将其基因沉默,在获得了各自的稳定转染细胞克隆后,进行了一系列体内外实验。结果表明CABYR-a过表达后,LTEP-a-2细胞的体内外生长与其对照空载细胞相比,均无显著差异,但初步结果提示过表达CABYR-a对LTEP-a-2细胞的实验性转移有抑制作用。在A549细胞中CABYR-a被沉默后,结果显示肺癌细胞的体内外生长能力明显提高;细胞在体外的移动和浸润能力及体内实验性转移能力与对照空载细胞相比显著提高。采用双向电泳进行差异蛋白筛选,鉴定出5个蛋白在CABYR-a沉默细胞中下调,10个蛋白上调。其中一些蛋白与肿瘤的转移密切相关,如T-complex protein1等。并发现在CABYR-a沉默的A549细胞中TGF-β1和TGF-β2表达明显高于其空载对照细胞。提示TGF-β信号通路可能参与了CABYR对肿瘤细胞生长和转移的抑制作用。综上所述,我们初步推断CABYR可能是肿瘤(至少在肺癌中)转移抑制基因。