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目的：构建亨廷顿舞蹈病(Huntington'sdisease，HD)的体外原代星形胶质细胞模型；研究亨廷顿蛋白(Hungtingtin，htt)氨基端片段htt552在星形胶质细胞中的代谢途径及其对自噬水平的影响；研究htt552对星形胶质细胞脑源性神经营养因子(brain-derivedneurotrophicfactor，BDNF)转录与分泌的影响。
方法：采用腺病毒介导野生型与突变型htt552片段转染的方法构建HD的原代星形胶质细胞模型，利用WesternBlot法和免疫荧光双标记法检测htt552在细胞内表达的水平及时程，采用MTT法测定腺病毒载体对细胞生存率的影响。运用WesternBlot法及免疫荧光双标记法检测自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)、自噬激活剂雷帕霉素（Rapamycin）和蛋白酶体抑制剂乳胞素(Lactacystin)对htt552在细胞内蓄积的影响。利用WesternBlot法和Real-timePCR法检测细胞模型中自噬相关蛋白LC3II和Beclinl的表达情况。采用MDC法检测细胞自噬体形成的情况。采用ELISA和WesternBlot法检测表达htt552后细胞内以及分泌的BDNF含量，采用Real-timePCR法测定htt552对细胞内BDNFmRNA及其不同转录本水平的影响。采用免疫荧光双标记法测定htt552与CREB结合蛋白(CBP)或高尔基复合体的共定位，从而研究htt552影响星形胶质细胞内BDNF转录和分泌的机制。
结果：腺病毒成功介导野生型与突变型htt552在原代星形胶质细胞中表达，该蛋白在细胞内主要分布于胞浆，而核内表达较少，部分细胞内可见突变型片段形成明显的聚集体。为了提高感染率和降低腺病毒对细胞的影响，以m.o.i为40的剂量加入病毒最为合适，感染率可达80％以上，感染后12hr直到7d都有蛋白表达，并且感染24hr到4d蛋白保持高表达。加入自噬抑制剂3-MA或者加入蛋白酶体抑制剂Lactacystin后，htt552在细胞内的蓄积量明显增加，其中突变型htt552蓄积更为显著且聚集体明显增多；加入自噬激活剂Rapamycin后，细胞内突变型htt552及其聚集体的含量显著降低，而对野生型片段无显著影响；在表达突变型和野生型htt552的两种细胞模型中，LC3II蛋白表达量显著增加，Beclinl的mRNA和蛋白表达水平均显著增高，MDC染色阳性的自噬囊泡数目显著增加；与野生型片段相比，表达突变型片段的细胞内LC3II与MDC染色阳性自噬囊泡的水平更高。免疫荧光实验显示，表达htt552-100Q的星形胶质细胞条件培养基(ACM)使原代培养的神经细胞突起分支数目减少、发育不良；ELISA和WesternBlot法检测ACM中BDNF含量，结果显示htt552-100Q抑制BDNF的产生，而野生型片段无显著影响；Real-timePCR实验显示htt552-100Q抑制了细胞内BDNFmRNA水平，其原因和该突变片段显著抑制BDNF促进子II、III、Ⅳ有关，而野生型片段对BDNF的转录无显著影响；免疫荧光双标记法实验结果显示，htt552-100Q的可溶性片段及其聚集体和核内的CBP存在共定位，可能影响BDNF的转录过程；ELISA和WesternBlot法检测细胞内BDNF含量，结果显示与表达野生型片段相比，表达htt552-100Q的细胞内BDNF含量显著升高，其中前体含量显著升高，而成熟的BDNF含量显著降低，提示htt552-100Q抑制BDNF的转运和成熟过程；免疫荧光双标记法实验显示，htt552-100Q的可溶性片段及其聚集体与BDNF囊泡和高尔基体共定位，并且使高尔基体的形态和分布发生变化，从而影响了BDNF的转运和分泌。
结论：成功构建高效表达htt552的体外HD星形胶质细胞模型，为研究HD的发病机制提供了一个新的平台；泛素-蛋白酶体途径和自噬/溶酶体途径均参与了htt552在细胞内的降解过程，而自噬-溶酶体途径是突变型htt552及其聚集体代谢的主要途径；htt552特别是突变型片段能够提高细胞自噬水平，从而加速自身代谢；突变型htt552能够抑制星形胶质细胞内BDNF的转录和分泌，从而对其周围神经元的生长发育造成影响；突变型htt552的可溶性片段及其聚集体与CBP、分泌囊泡及高尔基体结合，干扰了这些结构的正常功能，从而抑制BDNF转录和分泌。