目的通过筛选获得高表达丝切蛋白2(cofilin 2,CFL2)小鼠成肌细胞C2C12细胞株,分析CFL2基因高表达对C2C12细胞肌纤维的影响及相关信号通路关键成分的表达情况,探索分析CFL2基因影响肌纤维的分子机制,为其他相关研究提供借鉴。方法CFL2基因CDS序列首先连接到p MD18-T载体上,经PCR扩增后定向克隆至绿色荧光真核表达载体p EGFP-N1。利用脂质体将重组质粒转染入小鼠成肌细胞C2C12,经G418筛选14天后获得稳定转染细胞株。采用实时定量PCR方法和蛋白印迹法检测并统计分析CFL2、肌纤维有关成分(My HC、MLC和α-actin),以及信号通路关键因子(sk MLCK、MEF2C、AMPKα2、MAPK p38、Ca M和Rho A)的m RNA和蛋白质表达情况。结果1、成功获得CFL2基因真核表达载体p EGFP-N1-CFL2;获得具有不同CFL2基因表达量的C2C12稳转细胞株3株。2、采用实时定量PCR检测CFL2高表达C2C12细胞株发现,肌纤维成分中α-actin和My HC总量显著提高,MLC显著下降。而信号通路关键因子sk MLCK、MAPK p38、Ca M、Rho A和MEF2C的m RNA表达显著上升,仅AMPKα2的m RNA表达显著下降。3、采用Western Blot方法分析高表达CFL2的C2C12细胞株发现,肌纤维有关成分(α-actin、My HC总量、MLC)和信号通路关键因子(sk MLCK、AMPKα2、MAPK p38、Ca M、Rho A和MEF2C)蛋白质表达均显著上调,仅My HC中的My HC slow和My HC 2x蛋白表达显著下降。4、建立了CFL2与My HC slow、My HC 2x、α-actin或Ca M的相关数学模型。结论C2C12细胞中CFL2基因高表达提高肌纤维各个成分(α-actin、My HC总量、MLC)的表达量,促进肌纤维增长;但同时影响肌纤维类型。CFL2对肌纤维的影响机制可能涉及AMPK、Ca N/NFAT、Rho和MAPK 4个信号通路。CFL2与My HC slow、My HC 2x、α-actin或Ca M的蛋白表达量具有数学模型关系。