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背景:尽管获得性再生障碍性贫血（aplastic anemia,AA）的发病机制尚未完全阐明,但是异常免疫介导的造血干/祖细胞损伤（hematopoietic stem/progenitor cells,HSPCs）作为AA最主要的发病机制已获公认。高达70%的AA患者经强化免疫抑制治疗（intensive immunosuppressive therapy,IST）可获血液学缓解为此提供力证。然而,导致免疫异常以及促进免疫活化的具体机制尚不清楚。骨髓微环境在AA免疫异常中的作用有待研究。间充质干细胞（mesenchymal stem cell,MSC）作为骨髓微环境主要基质细胞之一,在AA发病机制中的作用尚未明确。明确骨髓来源的间充质干细胞（BM-MSC）在AA免疫异常机制中的具体作用,有助于深入了解AA的发生发展,并有望为AA的治疗提供新思路。目的:本研究旨在探讨AA患者及正常供者（healthy donor,HD）BM-MSC在细胞水平上的功能差异及分子水平上基因的差异性表达,阐明骨髓微环境改变的具体机制及其在AA免疫异常中的作用。方法:收集AA和HD外周血标本,分离单个核细胞,检测两者外周血淋巴细胞亚群比例,以及外周血血浆中干扰素γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）、白介素-8（IL-8）、白介素-17A（IL-17A）和白介素-10（IL-10）的浓度。同时,收集AA和HD骨髓标本,分离单个核,贴壁培养BM-MSC,检测两组MSC的形态、免疫表型、迁移、增殖、凋亡、周期、衰老、成脂、成骨、成软骨的能力,并评估其免疫抑制功能。对3例AA患者和3例HD来源BM-MSC进行转录组测序（RNA-seq）,分析两者差异性表达的基因、信号通路及生物学功能。结果:同HD相比,AA患者外周血CD8+T细胞比例明显升高（29.02%vs 19.68%,P<0.001）,CD4+T 细胞与 CD8+T 细胞比例显著降低（1.43 vs 2.54,P<0.001）。此外,AA患者外周血淋巴细胞亚群Thl（CD4+IFNγ+IL-4-T）细胞与Tcl（CD8+IFNγ+IL-4-T）细胞比例均明显升高（13.71%vs 10.76%和 25.82%vs 18.43%,P值分别为<0.001和0.009）。ELISA显示,AA患者外周血血浆中IFN-γ、TNF-α、IL-6及IL-8的比例明显高于HD,而IL-10的比例显著降低。分离HD及AA患者BM-MSC,发现两者MSC的免疫表型及染色体核型无异,然而形态差异明显。此外,AA患者BM-MSC增殖及迁移能力明显降低,而凋亡及衰老显著增加。MSC同T淋巴细胞共培养显示,AA-MSC抑制T淋巴细胞增殖、活化及分泌细胞因子（IFN-γ）的能力均显著低于HD-MSC。RNA-seq显示:①同HD相比,AA患者BM-MSC基因表达谱具有明显差异,差异性表达的基因有292个（Fold Change>2或<-2,P<0.05）,其中在AA-MSC中上调的基因有163个（PRSS1、PNLIPRP3、IL-34、CCL3、ZNF521等）,下调的基因有 129 个（GPRC5A、HHIP、CLIC3、DHRS9、DIRAS3）;②GO富集分析显示差异表达的基因主要富集于脂质代谢、免疫系统进程、细胞周期、细胞分化、脂肪酸代谢、凋亡、Wnt信号通路、自噬、细胞迁移等生物学功能;③KEGG显示差异表达的基因相关的信号通路为代谢通路、MAPK通路、Hippo通路、细胞周期、自噬、Wnt通路、mTOR以及PI3k/Akt通路等。结论:AA患者BM-MSC具有显著的功能缺陷,导致其免疫抑制功能减弱,在促进AA患者免疫激活中可能发挥一定的作用。背景:获得性再生障碍性贫血（aplastic anemia,AA）属于骨髓衰竭性疾病,主要由异常免疫介导。AA患者骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cell,MSC）免疫调节缺陷可能为导致免疫异常的机制之一。此外,AA-MSC成脂能力明显增强,导致AA患者骨髓脂肪化。然而,关于骨髓微环境中脂肪细胞因子尤其是瘦素,在AA发病机制中的作用尚未见报道。目的:探讨AA患者、骨髓增生异常综合征（myelodysplasia syndrome,MDS）患者和正常供者（healthy donor,HD）骨髓中瘦素浓度差异,并探究瘦素对AA患者和HD骨髓T淋巴细胞功能的影响以及引起这些功能改变的具体分子机制,以期找到可能的治疗靶点。方法:收集AA、MDS和HD骨髓标本,检测骨髓上清中瘦素的浓度,同时检测AA患者骨髓中调节性T细胞的比例（CD4+CD25briCD127dim,Treg）,分析瘦素浓度与Treg的相关性。检测AA和HD骨髓单个核细胞瘦素受体（leptin receptor,Lepr）mRNA的表达水平,并应用流式分析AA和HD患者骨髓来源T淋巴细胞亚群上Lepr的表达水平差异。在体外,评估瘦素对AA和HD骨髓T淋巴细胞增殖、活化及分泌细胞因子IFN-γ的影响。检测瘦素对CD4+CD25-T细胞向CD4+Foxp3+T细胞分化的影响。结果:AA患者骨髓上清中瘦素浓度显著高于HD和MDS（13.07±2.09 ng/ml vs 3.90±0.71 ng/ml vs 4.47±0.98 ng/ml;P=0.001 和P=0.03）,且与 AA 骨髓中Treg细胞比例呈明显负相关（R=-0.70,P=0.005）。AA-MSC的成脂能力明显高于HD-MSC。在成脂第7天和第14天,AA-MSC中瘦素mRNA的表达均显著高于 HD-MSC（1272.00 vs 633.00,P=0.02;3588.00 vs 709.50,P=0.002）。而且,成脂过程中,AA-MSC的细胞培养上清中瘦素的浓度持续高于HD-MSC（12.15 pg/mlvs 8.44 pg/ml,P=0.003;17.96 pg/ml vs 10.91 pg/ml,P<0.001）。此外,AA患者骨髓单个核细胞Lepr mRNA表达水平显著高于HD（12.21±2.30 vs 1.42±0.52,P=0.003）。流式分析显示,AA患者骨髓来源CD8+T细胞、CD4+CD25-T细胞和CD4+CD25+T细胞Lepr的平均荧光强度均明显高于HD（54.22±4.65 vs 40.45±3.23,P=0.02;117.40±9.83 vs 65.79±6.62,P<0.001;209.20±23.36 vs 142.10±14.61,P=0.02）。在体外,瘦素可显著促进 AA患者骨髓来源CD4+和CD8+T细胞的增殖（P=0.007和P=0.04）,而对HD骨髓来源T细胞增殖无明显影响（P=0.52和P=0.26）。此外,瘦素显著促进AA患者骨髓来源CD4+和CD8+T细胞表面CD25和CD69的表达,而仅促进HD骨髓来源CD4+和CD8+T细胞表面CD25的表达。瘦素亦促进AA患者和HD骨髓来源CD4+和CD8+T细胞分泌IFN-γ,而对IL-4的分泌无影响。而且,瘦素明显抑制AA和HD骨髓来源CD4+CD25-T细胞向CD4+Fxop3+T细胞分化。结论:AA患者MSC成脂增强,导致骨髓脂肪化,产生高水平的瘦素,激活AA患者T淋巴细胞而抑制Treg细胞的生成,在导致AA患者免疫异常中具有一定的意义。