论文部分内容阅读
目的研究十溴联苯醚(decabromodiphenyl ether,BDE-209)暴露对小鼠海马神经元细胞系(HT-22细胞)的细胞生长形态结构、细胞存活率、细胞凋亡损伤和内质网应激通路中的相关蛋白caspase12、GRP78、PERK蛋白表达水平的影响,初步讨论BDE-209对HT-22细胞凋亡的影响和诱导凋亡的机制,为研究BDE-209致HT-22细胞凋亡的机制提供依据。方法培养HT-22细胞之后暴露于BDE-209中,总共分为6个剂量组,分别为对照组(含有1%DMSO的培养基)和剂量组(剂量分别为6.25μg/ml BDE-209、12.5μg/mlBDE-209、25μg/ml BDE-209、50μg/ml BDE-209、100μg/ml BDE-209)。每个实验组设置3个平行样。染毒24小时之后在倒置显微镜下观察每组的细胞形态差异;MTT比色分析法检测每组细胞存活率;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡情况;采用免疫印迹法检测HT-22细胞中caspase12、GRP78、PERK蛋白的表达情况。结果倒置显微镜观察各个处理组的HT-22细胞形态,实验组可以观察到细胞形态有所变形,细胞胞膜有发泡现象,随着染毒剂量的增加,神经突起变短,细胞空泡增加。在C(12.5μg/ml BDE-209)、D(25μg/ml BDE-209)、E(50μg/ml BDE-209)染毒剂量组可以看到细胞有明显的皱缩、空泡、脱落、消失。在F(100μg/mlBDE-209)染毒剂量组中细胞几乎已经完全脱落。MTT比色法检测HT-22细胞存活率,不同剂量染毒24小时与对照组相比,染毒剂量组细胞存活率显著下降,其中染毒剂量为12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml组差异具有统计学意义(P<0.05);同一剂量BDE-209染毒不同时间时细胞存活率也相应下降,染毒时间为8小时、12小时、16小时、20小时、24小时、30小时的细胞存活率与对照组相比具有统计学差异(P<0.05)。Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡情况,用试剂盒进行染色之后用流式细胞仪进行检测,结果显示:随着染毒剂量的增加,分布在第二象限的早期凋亡细胞和第三象限的晚期凋亡细胞的比例呈现增加的趋势,而第一象限的正常细胞的比例则逐渐减少。免疫印迹结果显示:染毒剂量为12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml组与对照组之间caspase12、GRP78、PERK蛋白表达增加,caspase12/β-actin、GRP78/β-actin、PERK/β-actin之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论BDE-209染毒可以导致HT-22细胞形态发生改变和存活率的显著降低,并与BDE-209的染毒时间和剂量呈现一定的时间和剂量效应关系。BDE-209暴露可以导致HT-22细胞凋亡,并引起内质网应激相关蛋白caspase12、GRP78、PERK的表达增加。