论文部分内容阅读
本试验研究了绵羊幼羔超数排卵和成年羊卵母细胞的体外成熟、孤雌激活以及体细胞核移植胚胎发育的特点,以期优化绵羊超排、卵成熟、卵活化、胚胎发育条件,为开展发育机理研究及提高绵羊克隆效率提供进一步的技术支持。本试验研究结果主要包括以下几个方面:(1)本试验采用宁波、中科院和加拿大激素分别对幼羔进行超排处理,对比不同激素对幼羔超排效果的影响。其可用COCs百分比分别为69.6%、87.9%、88.4%,平均可用卵数分别为15.1枚、25.1枚、27.1枚,差异显著(P<0.05),说明宁波产激素超排效果不如中科院和加拿大激素,而中科院和加拿大之间的可用COCs百分比和平均可用卵数差异不显著(P>0.05),说明中科院和加拿大激素使用效果相差不大,但是加拿大激素可用COCs百分比和平均可用卵数比中科院激素分别高0.5%和2枚,说明加拿大激素效果最好。(2)添加FBS培养的卵母细胞,幼羔组和成年羊组的成熟率分别为51.1%和77.3%,两者差异显著(P<0.05),添加ESS培养的卵母细胞,幼羔组和成年羊组分别为59.0%和78.9%,两者差异显著(P<0.05),说明成年羊卵母细胞的体外成熟效果要优于幼羔。添加ESS的幼羔组成熟率比添加FBS组高7.9%,两者差异显著(P<0.05),说明添加ESS能够提高超排羔羊卵母细胞的体外成熟率。(3)比较Ionomycin+6-DMAP和A23187+(CHX和CB)两种激活方式,幼羔一和幼羔二组获得的卵裂率和囊胚率分别为50.7%、13.4%和48.0%、11.1%,两组的卵裂率和囊胚率差异皆不显著(P>0.05),成年羊一和成年羊二组的卵裂率和囊胚率分别为69.5%、29.5%和67.6%、28.6%,两组间卵裂率和囊胚率差异不显著(P>0.05),但是,成年羊一组的卵裂率和囊胚率比成年羊二组分别高出1.9%和0.9%,幼羔一组的卵裂率和囊胚率比幼羔二组分别高出2.7%和2.3%,而成年羊组卵裂率和囊胚率皆显著高于幼羔组(P<0.05),说明两种激活方式都能有效激活绵羊卵母细胞,而成年羊卵母细胞激活后发育效果要比幼羔卵母细胞好。(4)比较体外培养22~24h后幼羔卵母细胞和成年羊卵母细胞去核效果,其去核个数、去核成功率分别为72、75、60.0%、50.3%,幼羔卵母细胞去核成功率比成年羊卵母细胞高9.7%,两者差异显著(P<0.05),说明体外成熟22~24h的幼羔卵母细胞去核效果优于成年羊卵母细胞。(5)幼羔组和成年羊组重构胚的卵裂率和囊胚率分别为29.0%、5.0%、58.8%、17.0%,成年羊组卵裂率和囊胚率比幼羔组分别高出29.8%和12%,差异显著(P<0.05),说明幼羔超排卵母细胞核移植重构胚发育效果不如成年羊卵母细胞。