京尼平苷的酶解工艺及其产物的降糖活性研究

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茜草科植物栀子主要活性成分为环烯醚萜类的京尼平苷(geniposide),具有保肝利胆、抗炎、抗肿瘤、抗诱变、抗氧化、抗血栓、抗高血压、保护神经细胞、修复损伤组织、降血糖等药理活性;特别是降血糖作用近年来受到极大关注。研究表明,京尼平苷的生物活性大多是通过其苷元京尼平(genipin)来实现的。本课题首先考察了京尼平苷在栀子果中分布,HPLC检测表明,京尼平苷主要存在于栀子果仁中,果皮中含量较少。其次,首次采用闪式提取法改进了苦杏仁酶的提取工艺,并对该工艺进行了优化,得出的较优提取条件:50.0g脱脂苦杏仁粉,0.0625mol/L预冷氨水(500mL+450mL),闪式提取两次(120s+90s),纱布过滤,收集滤液,醋酸调pH4.0,滤去杂蛋白,4倍量乙醇沉淀苦杏仁酶,抽滤,洗涤,冷藏干燥即得;并用DNS法测定苦杏仁酶的比活力。再次,以所提取的苦杏仁酶水解京尼平苷,采用四因子五水平二次通用旋转试验设计来优化水解工艺,以水解得率为指标,考察缓冲液pH值、反应温度、反应时间和加入酶量四个主要因素对工艺的影响;确定出较合适的工艺条件:缓冲液pH5.25,反应温度为50.5℃,反应时间为90min,加入酶量为10;通过理化性质、纯度检验及NMR鉴定确定水解产物即为京尼平。最后,利用四氧嘧啶致小鼠糖尿病模型研究了京尼平苷和京尼平的降血糖作用;结果显示,在一定剂量范围内,京尼平苷、京尼平均能提高模型小鼠存活率;降低糖尿病模型小鼠血糖值,具有一定的降糖作用。
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