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新孢子虫病(Neosporiasis)是由犬新孢子虫(Neospora caninum)寄生于犬、牛、马、羊等多种宿主动物细胞内而引起的一种原虫病。新孢子虫病是多种家畜共患的一种原虫病,该病对牛的危害尤为严重。目前,还没有防制新孢子虫病的有效措施,一般认为疫苗免疫是预防牛流产和降低经济损失的可行性措施,因此,开发新疫苗已成为该领域研究热点。本试验通过体外培养新孢子虫,并采用液氮-水浴反复冻融及超声波裂解虫体,经葡聚糖凝胶层析分离纯化出多种可溶性抗原,将分离纯化的可溶性抗原经SDS-PAGE分析蛋白分子量大约为43KDa、36KDa和33KDa,分别与新孢子虫两种表面抗原和一种致密颗粒抗原相对应,经Western-blotting分析,所分离的抗原蛋白均具有反应原性。将纯化蛋白浓缩合并分别辅以Cp-M、IMS1313和Polygen三种佐剂及PBS免疫沙鼠,测定沙鼠的体液免疫和细胞免疫应答,以评价疫苗的免疫效果。应用IFAT对免疫后沙鼠每周抗体效价进行测定,结果显示,三个佐剂组的抗体效价均高于PBS组,其中Cp-M组效价最高,从二免后第二周起PBS组与三个佐剂组抗体效价均差异极显著(P＜0.01),最高抗体效价可达1:1600,攻毒后,各组抗体效价均显著上升,Cp-M组最高可达1:3 200。免疫沙鼠的细胞免疫测定分别采用检测T淋巴细胞亚群CD4~+、CD8~+百分含量及淋巴细胞转化试验进行评估。结果显示,疫苗Cp-M组、IMS1313组、Polygen组和PBS组的CD4~+细胞含量均高于对照组,Cp-M组、IMS1313组和Polygen组与对照组均差异极显著(P＜0.01)。四种疫苗组的CD8~+细胞含量均高于对照组,Cp-M组、IMS1313组与对照组差异极显著(P＜0.01),四种疫苗组的CD4~+/CD8~+值均高于对照组,Cp-M组与对照组差异极显著(P＜0.01)。疫苗Cp-M组淋巴细胞转化率明显高于对照组,差异显著(P＜0.05)。攻毒试验后经计算得出疫苗保护率分别为,Cp-M组75%,IMS1313组62.5%,Polygen组50%,PBS组50%。本试验的结果显示新孢子虫亚单位疫苗可以激活体液免疫和细胞免疫反应,具有一定的保护作用,并可为新孢子虫新型疫苗的研制提供参考。