过敏性紫癜患者外周血单个核细胞DNA甲基化异常的研究

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目的:通过研究过敏性紫癜患者外周血单个核细胞基因组DNA甲基化状态、IL-2RG基因表达及其甲基化状态,从而探讨过敏性紫癜的表观遗传学改变。方法:(1)密度梯度离心分离正常人、病人的外周血单个核细胞;试剂盒提取RNA和DNA;(2)整体甲基化定量试剂盒检测外周血单个核细胞中基因组DNA甲基化水平;(3)实时定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR)检测DNA甲基转移酶(DNMT)和甲基结合蛋白(MBD)的mRNA的表达水平;(4)甲基化特异性聚合酶链反应检测IL-2RG启动子区域DNA甲基化水平,实时定量聚合酶链反应检测外周血单个核细胞中IL-2RG的mRNA表达。结果:(1)与正常对照组相比,过敏性紫癜患者外周血单个核细胞基因组DNA高甲基化(P=0.041),而基因组DNA甲基化水平与过敏性紫癜患者活动性评分之间没有明显相关性;且不同类型的过敏性紫癜患者之间基因组DNA甲基化水平亦没有明显差异(P>0.05)。(2)过敏性紫癜患者外周血单个核细胞中DNMT1, DNMT3b和MBD1mRNA水平较正常对照组明显升高(P=0.001,P=0.0001,P=0.014),MBD2及MBD4的mRNA水平明显降低(P=0.013,P=0.001)。过敏性紫癜患者DNMT3b的mRNA表达量与基因组DNA甲基化水平呈正相关(R=0.503,P=0.043)。(3)过敏性紫癜患者外周血单个核细胞中IL-2RG的mRNA水平较正常对照组明显升高(P=0.018),IL-2RG启动子区域的甲基化水平较正常对照组明显降低(P=0.048)。外周血单个核细胞中工L-2RG的mRNA的水平与工L-2RG启动子区域甲基化水平呈负相关(R=0.549,P=0.01)。结论:过敏性紫癜患者外周血单个核细胞基因组DNA高甲基化,且可能与DNMTs及MBDs表达异常有关;过敏性紫癜患者外周血单个核细胞中IL-2RG高表达与其调控序列低甲基化有关,从而参与疾病的发病过程。
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