目的:本研究拟通过体外实验探索小鼠胚胎腭突间充质细胞(mouse Embryo Palatal Mesenchymal cells,mEPMCs)初级纤毛内转运系统(Intraflagellar Transport,IFT)关键组件IFT122与Shh信号通路的关系以及IFT122调控mEPMCs增殖的机制,试图初步阐明mEPMCs初级纤毛与Shh信号通路在腭发育中的作用,以期为腭裂发生的防治提供前期理论基础。方法:获取ED13.5的C57BL/6J小鼠胚胎腭突组织,通过酶消化法结合机械分离法获取原代mEPMCs进行体外培养并通过ICC技术对其进行鉴定。利用RNAi技术下调IFT122的表达,通过Real-time PCR和WB技术对其沉默效率进行验证。(1)将mEPMCs分为未作处理的对照组和沉默IFT122的IFT122-Kd组:使用IF技术标记AA-Tub(RFP)观察初级纤毛形成情况,标记Smo(GFP)观察Smo的荧光密度变化;Real-time PCR和WB检测Shh信号通路关键受体Smo和转录因子Gli3的表达变化以及细胞增殖标志物PCNA和细胞周期因子Cyclin D1的表达变化;CCK-8法检测mEPMCs的数量变化。(2)沉默mEPMCs中IFT122的基础上加入SAG,将mEPMCs分为对照组、IFT122-Kd组和IFT122-Kd+SAG组:使用Co-IF技术同时标记AA-Tub(RFP)和Smo(GFP)观察Smo与初级纤毛的共定位变化;Real-time PCR和WB技术检测Smo、Gli3、PCNA和Cyclin D1的表达变化;CCK-8法检测mEPMCs的数量变化。结果:ICC结果显示mEPMCs中Vim表达阳性,P-CK表达阴性。(1)IF结果显示IFT122-Kd组中初级纤毛发生率降低且长度变短,Smo的荧光密度降低;Real-time PCR和WB结果显示IFT122-Kd组中IFT122、Smo、Gli3、PCNA及Cyclin D1的表达低于对照组;CCK-8结果显示IFT122-Kd组中mEPMCs数量增长速度减慢且在96h数量较之前开始减少。(2)Co-IF结果显示SAG的加入促使Smo大量进入初级纤毛;Real-time PCR和WB结果显示IFT122-Kd+SAG组中Smo、Gli3、PCNA及Cyclin D1的表达相较于IFT122-Kd组增高,但仍低于对照组;CCK-8结果显示IFT122-Kd+SAG组中mEPMCs的数量相较于IFT122-Kd组增多,但仍少于对照组。结论:(1)沉默IFT122导致mEPMCs初级纤毛生长缺陷;(2)IFT122可通过Shh信号通路参与调控mEPMCs增殖;(3)mEPMCs中Shh信号通路的传导依赖于初级纤毛。