高压氧对大鼠肾移植后缺血再灌注肾组织中Calpain、cPLA2表达的影响

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目的:建立同种大鼠缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)肾移植模型,检测细胞凋亡的内质网通路中钙离子依赖性蛋白酶(Calpain)及丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路中胞浆型磷脂酶A2(cytosolic phospholipase A2,cPLA2)在大鼠移植肾中的表达变化,同时观察高压氧(hyperbaric oxygenation,HBO)治疗对Calpain、cPLA2表达的影响,初步探讨细胞凋亡的内质网通路及MAPK通路在肾IRI发生中的作用以及HBO治疗对该通路的影响。方法:采用前期建立的同种SPF级雄性SD→SD大鼠肾移植模型石蜡标本,分为假手术组、肾移植组和肾移植﹢HBO治疗组(简称HBO治疗组),每组以移植后1h、3h和5h为时间点各分为3小组。假手术组:行右肾切除后关闭腹腔;肾移植组:行同种异体肾移植手术;HBO治疗组:肾移植后,分别于术后0h、2h和4h置于动物实验用高压氧舱治疗1h。移植组、HBO治疗组分别在术后1h、3h、5h切除移植肾脏,留取移植肾标本。在相同的时间点,假手术组切除左肾,留取左肾组织并处死大鼠。将组织标本制备的石蜡组织块进行切片,并通过苏木素-伊红染色(HE染色)法观察组织病理改变,免疫组织化学(IHC)法检测组织中calpain、cPLA2蛋白的表达情况。结果:1.肾组织HE染色变化:假手术组:肾组织形态正常,各时间点无明显组织结构差异。肾移植组:间质血管扩张,系膜细胞增生,肾小球体积增大,肾小管管腔扩张及其上皮细胞肿胀,随再灌注时间延长,部分肾小球旁出现中性粒细胞浸润,小管管腔内逐步出现蛋白、红细胞管型,小管上皮呈颗粒样变,组织损伤较重;HBO治疗组:在1h及3h时,肾组织病变程度与肾移植组差异较小,在5h时,与肾移植组对比发现,中性粒细胞浸润、颗粒样改变、蛋白管型、红细胞管型明显减少,组织损伤减轻。2.肾组织calpain、cPLA2蛋白的表达变化:免疫组织化学法检测calpain、cPLA2表达:calpain和cPLA2均在肾小管上皮细胞胞浆中表达,肾小球细胞内未见明显表达。相对定量分析显示:假手术组中,在各时间点二者的表达水平未见明显差异(P>0.05);随再灌注时间延长,二者的表达水平在肾移植组及HBO治疗组中均呈明显上升趋势(P<0.05),且明显高于假手术组(P<0.05);但在各时间点二者在HBO治疗组中的表达水平则明显低于肾移植组(P<0.05)。结论:1.肾移植后早期即已产生组织损害,再灌注后移植肾组织的calpain和cPLA2蛋白的表达水平明显增加,随再灌注时间的延长越明显。2.HBO治疗可明显抑制缺血再灌注移植肾组织中calpain、cPLA2蛋白的表达。
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