论文部分内容阅读
目的:采用SD大鼠建立手术脑损伤(SBI)模型。模型建立后向胸腺内分别注射抗原卵清蛋白(OVA)或髓鞘碱性蛋白(MBP)拟诱导免疫耐受,以治疗SBI所致的继发性脑损伤。探讨胸腺内注射“旁观者抗原”OVA拟诱导免疫耐受经“旁观者抑制效应”途径治疗SBI所致的继发性脑损伤的疗效。探讨胸腺内注射脑抗原MBP拟诱导免疫耐受治疗手术脑损伤所致的继发性脑损伤的疗效,并比较两种治疗效果的优劣。方法:采用随机法将32只雄性SD大鼠(体重270~300g)分为4组,每组8只。A组:SBI+胸腺内注射OVA组(OVA组);B组:SBI+胸腺内注射MBP组(MBP组);C组:SBI+胸腺内注射生理盐水组(对照组);D组:假手术组。各组SD大鼠于SBI后第1、3、7、14、21 d,采用ELISA检测血清促炎因子IL-2、抗炎因子IL-4;流式细胞仪检测血CD4+T/CD8+T细胞比值;行改良大鼠神经功能评分(MNSS);头MRI检测脑水肿体积。SBI后第21 d做脑切片Fas L免疫组化,脑切片TUNEL荧光染色。结果:1、胸腺内注射OVA建立免疫耐受与对照组相比,OVA组IL-2浓度在SBI后第3、7、14 d下降(P<0.05);而IL-4浓度在SBI后第7、14 d升高(P<0.05)。OVA组CD4+T/CD8+T细胞比值在SBI后第7、14 d与对照组比较降低(P<0.05),且OVA组CD4+T/CD8+T细胞比值在SBI后第3、7、14 d持续降低。与对照组相比,SBI后第21 d OVA组大鼠脑细胞Fas L表达量增加(P<0.05)且脑细胞凋亡比例降低(P<0.05)。与对照组相比,OVA组脑水肿体积在SBI后第14、21 d减小(P<0.05)。与对照组相比,OVA组大鼠MNSS评分仅在SBI后第14d降低(P<0.05)。2、胸腺内注射MBP建立免疫耐受与对照组相比,在SBI后第3、7、14 d,MBP组IL-2浓度降低、IL-4浓度升高(P<0.05)。MBP组CD4+T/CD8+T细胞比值与对照组对比,在SBI后第7、14 d下降(P<0.05),并且在SBI后第3、7、14 d,MBP组CD4+T/CD8+T细胞比值持续下降。与对照组比较,SBI后第21 d,MBP组脑细胞Fas L表达量增加(P<0.05),并且脑细胞凋亡比例下降(P<0.05)。与对照组比较,MBP组大鼠脑水肿体积在3、7、14、21 d降低(P<0.05)。MBP组大鼠MNSS评分在SBI后3、7、14、21 d低于对照组(P<0.05)。3、胸腺内注射OVA或MBP建立免疫耐受的强度及疗效对比(1)、两种抗原诱导建立疫耐受的强度OVA组和MBP组在SBI后第3、7、14 d分别与对照组相比,前2者都能降低IL-2浓度(P<0.05);OVA组在SBI后第7、14 d与对照组相比能提高IL-4浓度(P<0.05);MBP组在SBI后第3、7、14 d与对照组比较能升高IL-4浓度(P<0.05)。与对照组比较,OVA组、MBP组CD4+T/CD8+T细胞比值都在SBI后7、14 d降低(P<0.05)。因此,两种抗原对降低促炎因子、升高抗炎因子、降低CD4+T/CD8+T细胞比值的水平没有统计学差异(P﹥0.05)。(2)、两种抗原治疗SBI的效果OVA组、MBP组在SBI后第21 d大鼠脑细胞Fas L表达量与对照组比较都增高(P<0.05),且MBP组Fas L表达量明显大于OVA组(P<0.05)。与对照组比较,OVA组、MBP组TUNEL示SBI后第21 d脑细胞凋亡比例降低(P<0.05),且MBP组脑细胞凋亡比例低于OVA组(P<0.05)。与对照组比较,OVA组脑水肿体积在SBI后第14、21d减小(P<0.05)。MBP组脑水肿体积在SBI后第3、7、14、21 d减小(P<0.05)。MBP组脑水肿体积在SBI后第3、7、14、21 d小于OVA组(P<0.05)。在SBI后第14 d,OVA组与对照组比较大鼠MNSS评分降低(P<0.05)。MBP组大鼠MNSS在SBI后第3、7、14、21d低于对照组(P<0.05)。MBP组大鼠MNSS在SBI后第3、7 d低于OVA组(P<0.05)。结论:1、开颅手术可促进炎症反应,增强免疫反应,进而导致脑细胞凋亡,导致脑水肿,加重神经功能障碍。胸腺内注射“旁观者抗原”OVA可致诱导免疫耐受,通过免疫耐受的“旁观者抑制效应”途径降低炎症反应及过度的免疫反应,进而减轻脑水肿,促进神经功能恢复。2、与本课题组前期研究结果一致,胸腺内注射脑抗原MBP可致免疫耐受,通过免疫耐受途径可以降低大鼠炎症反应、降低过度的免疫反应,减少脑细胞凋亡,进而减轻脑水肿,促进神经功能恢复。