【摘 要】
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第一部分:建立和应用直接免疫荧光检测人外周血单个核细胞中Cpn特异性抗原的方法.从人全血中分离出PBMC,与荧光素标记的Cpn单克隆抗体(FITC-TT-401)在一定条件下反应,在荧光
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第一部分:建立和应用直接免疫荧光检测人外周血单个核细胞中Cpn特异性抗原的方法.从人全血中分离出PBMC,与荧光素标记的Cpn单克隆抗体(FITC-TT-401)在一定条件下反应,在荧光显微镜下观察是否有特征性苹果绿亮点,以此来判断个体是否感染Cpn,PBMC中是否有Cpn活菌存在.该方法简便、灵敏、可靠、节约试剂.并将该方法应用于140例有颈动脉内膜增厚或粥样斑块的患者组和50例健康对照组.第二部分:Cpn多克隆抗体的制备及应用.用Cpn菌株TW-183(2×10<8>ifu)10μl与300μl福氏完全佐剂混匀加热后皮下多点注射新西兰白兔(New Zealand White,NZW).在第14,28和42天时用10μl菌株与300μl福氏不完全佐剂混匀加热皮下多点注射,通过微量免疫荧光法检测血清中抗Cpn抗体效价,效价达到预期(≥1:32)后,颈动脉插管放血50ml,分离血清20ml,用硫酸铵盐析法、DEAE-SepHadex A-50层析法逐步纯化抗Cpn(immunoglobulin,IgG)抗体,并用双向免疫扩散法鉴定其效价,达1:32以上,然后用异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiacyanate,FITC)标记,得到标有荧光素的Cpn多克隆抗体.
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