SPF鸭TAP单倍型对鸭瘟感染敏感性的影响

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抗原处理相关转运体(Transporter associated with antigen processing,TAP)是主要组织相容性复合体(Major histocompatibility complex,MHC)I类分子抗原递呈途径中的关键蛋白。本研究利用TAP单倍型无特定病原体(Specific pathogen free,SPF)鸭,分别通过鸭瘟标准强毒和弱毒疫苗接种试验,分析Tap多态性对鸭瘟致病性和免疫应答能力的影响。本研究首先优化了国家禽类实验动物种子中心培育的HBK-SPF鸭3个TAP单倍型鸭的遗传学检测方法。经过对HBK-SPF种鸭Tap2基因组序列的多态性分析,确定Tap2基因前663 nt为遗传学检测区域。在此基础上建立了Tap2基因分型PCR检测方法,对现存F3代B2、B3和B4系鸭进行遗传学稳定性检测。结果显示,B2和B4系鸭与F0代基因型完全一致,但B3鸭群内出现2种基因型,表明在育种过程中曾发生过一次遗传学污染。利用HBK-SPF鸭B2系TAP蛋白肽结合区的大肠杆菌表达产物制备了特异性单抗1A6。截短表达法初步鉴定单抗针对的抗原表位位于TAP2蛋白297NARHQMLQQAVLDATAGTGMVVQEAI322。利用1A6对鸭外周血淋巴细胞进行间接免疫荧光试验,结果为阳性。对SPF白来航鸡、鸭、SPF长白猪、常规鹌鹑和鹅的十二指肠石蜡切片进行免疫组织化学检测,结果在鸡和鸭肠粘膜固有层检测到大量特异性信号,对鹅、猪和鹌鹑显示阴性。利用1A6对鸭瘟疫苗免疫-攻毒鸭的肠黏膜细胞进行透射电镜检测,在细胞核核膜上清晰看到特异性免疫金颗粒。利用鸭肠炎病毒(Duck enteritis virus,DEV)标准强毒株CSC对7日龄B2、B3、B4以及第2代封闭群SPF金定鸭(JD)进行感染试验。结果B3系鸭2 dpi出现死亡,比JD鸭早2 d,死亡鸭盲肠中DEV UL6基因的拷贝数、十二指肠中MHC I类分子、IFN-α、IFN-β和IFN-γ的平均转录水平,以及哈德氏腺中IgA的含量均高于其它3个品系。利用鸭瘟弱毒活疫苗(K-CKCE株)接种7日龄B2、B3、B4和JD鸭。结果表明,接种前和接种后14 d的B2、B3和B4鸭都能通过免疫组化在肠道粘膜检测到TAP蛋白,而JD鸭免疫14 d后方能达到检测阈值;14和28 d时,B3鸭盲肠中DEV的拷贝数最低,而JD最高;B2系鸭28 d仍能从哈德氏腺和胆汁中检测到高表达的IgA,始终高于其他组,MHC I、IFN-α、IFN-β和IFN-γ的转录水平上升最快,CD4+/CD8+细胞的比值同JD鸭正相反,其它品系鸭的MHC I、IFN-α、IFN-β和IFN-γ的转录水平逐渐下降。上述研究表明,TAP单倍型绍兴麻鸭(HBK-SPF)与封闭群金定麻鸭(JD-SPF)在对鸭瘟强毒和疫苗接种表现出不同的免疫应答能力,B3系对强毒感染敏感,而B2系对疫苗接种应答能力更强。本研究为选育疫病易感型SPF鸭提供了依据。
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