目前心血管疾病的发病率呈逐年上升趋势，对人类健康构成了极大威胁。这些疾病多以血管功能失衡及损伤修复异常所引起的血管重塑为病理学基础。肺动脉高压（pulmonary arterial hypertension，PAH）是其中具有代表性的疾病之一。它是一类以病理性血管增殖和重塑为特征的肺小动脉疾病，肺血管阻力呈进行性升高，最终可导致右心功能衰竭和死亡。肺动脉高压一旦诊断明确预后极差，迄今为止肺动脉高压的治疗仍不能彻底逆转肺小动脉的病理性重塑，但早期诊断及时干预能显著减缓肺动脉高压的病理进程，改善预后。目前诊断肺动脉高压的金标准为右心导管术（Right heartcatheterization，RHC），但它为有创检查，可能会引起严重并发症，同时对设备及医师水平要求高，并不能作为常规检查手段大范围推广。超声心动图（Ultrasoniccardiogram，UCG）是目前早期筛查肺动脉高压的有效手段，但由于多方面原因UCG对肺动脉压的估测存在较大误差。在循环血生物标志物方面研究较多的是脑钠肽和脑钠肽前体，但其功能主要在于肺动脉高压的危险分层及作为预后标志物。总之，目前缺少诊断肺动脉高压的循环血标志物。微小RNA（microRNA，miRNA）是一类内源性非编码小分子RNA，能在转录后水平发挥基因调控作用。目前发现循环血中miRNA能以多种形式稳定存在，逃避血浆RNA酶的消化，并且循环血miRNA在疾病状态下其表达丰度可出现显著变化，可以用作疾病的生物标志物。在心血管方面目前有部分报道循环血miRNA可以作为心肌梗死、心力衰竭等疾病的生物标志物。本实验旨在初步探索循环血miRNA能否作为肺动脉高压的诊断标志物。一、候选循环血miRNA在肺动脉高压小鼠模型中的表达检测研究目的：建立肺动脉高压小鼠模型，初步探索模型中候选的循环血miRNA的表达情况。研究方法：（一）建模：采用小鼠（C57）按60mg/kg一次性腹腔注射野百合碱（MCT）的方法建立肺动脉高压动物模型，模型分组：空白对照组（control，n=12）、MCT注射后两周组（2wk-MCT，n=12）、MCT注射后四周组（4wk-MCT，n=16）。模型建立成功与否采用以下三方面验证：1、建模组与对照组一般情况观察比较；2、建模组与对照组肺切片HE染色观察比较；3、建模组右心病理性肥大验证即建模组与对照组心脏切片HE染色观察及心肌细胞肥大标志物ANP（Nppa）、α-MHC（myh6）、β-MHC（myh7）的检测比较。（二）筛选候选的循环血miRNA：根据文献报道及本科室前期工作筛选出本次实验的候选循环血miRNA进行验证，确立循环血miRNA内参。（三）候选miRNA实时定量PCR验证：采用基于SYBR Green荧光染料的方法对三组小鼠候选的10个循环血miRNA行实时定量PCR检测验证。实验结果：（一）建模组小鼠整体状态较对照组差，主要表现为饮食及活动减少，反应迟钝。肺组织HE染色可见建模组小鼠与对照组相比肺小动脉管壁明显增厚，中层平滑肌增生肥厚，并伴炎性细胞浸润，管腔变窄。4wk-MCT组与对照组相比，右心室室壁明显肥厚，右室腔扩大，心肌细胞肥大标志物Nppa、myh7表达升高（P<0.01，P<0.05）、myh6表达降低（P<0.05）。（二）我们选出10个miRNAs作为本次实验的候选循环血miRNA进行验证，分别为miR-451、miR-21、miR-150、miR-126、miR-23b、miR-191、miR-204、miR-26a、miR-145、miR-210。采用循环血miR-16作为定量PCR内参。（三）三组小鼠候选miRNA检测发现循环血miR-451在两建模组即2wk-MCT组（0.50±0.28）和4wk-MCT组（0.52±0.38）中的相对表达量与对照组（1.00±0.45）相比明显降低（P<0.05），在PAH模型早期即2wk-MCT组中miR-451与对照相比即有显著下降（P<0.05），但4wk-MCT组与2wk-MCT相比未见进一步降低（P>0.05）。MiR-126、miR-145、miR-191、miR-21、miR-150的表达水平无显著性变化，miR-26a、miR-23b、miR-204、miR-210的CT值过大或未能检测到。二、循环血miR-451对肺动脉高压的临床诊断价值分析研究目的：候选的循环血miRNA在小样本临床肺动脉高压患者中的表达情况，初步评估循环血miR-451诊断肺动脉高压的价值及其与超声心动图联合诊断肺动脉高压的价值。研究方法：（一）采集拟诊肺动脉高压收住院并拟行右心导管术检查患者的术前血样3～5ml左右。根据右心导管数据将入选患者分为两组：肺动脉压力正常的对照组（mPAP≤20mmHg）、肺动脉高压组（mPAP≥25mmHg）。收集入选患者相关临床资料，对两组血样行RNA抽提，实时定量PCR检测候选循环血miRNA的表达变化。（二）采用接受者工作曲线（ROC curve）评估循环血miR-451诊断肺动脉高压的价值。（三）建立二分类Logistic回归模型，评估循环血miR-451联合超声对于诊断肺动脉高压的价值。实验结果：（一）在这部分研究中我们发现循环血miR-451在临床肺动脉高压组中的表达量（0.66±0.05）与对照组（1.00±0.06）相比同样有着显著性下降（P<0.01），而循环血miR-126、miR-150、miR-21在两组间的表达未观察到显著性差异，miR-145、miR-191、miR-26a、miR-23b、miR-204、miR-210的CT值过大或未能检测到。（二）循环血miR-451相对表达量单独诊断肺动脉高压的曲线下面积为0.767（95%CI:0.650～0.884，P<0.01），接近于目前首选无创筛选检查—超声心动图0.829（95%CI:0.721～0.936，P<0.01）。在miR-451相对表达量取值为0.789时，其敏感性和特异性分别为72.7%和73.3%。（三）采用前进法逐步回归建立二分类Logistic回归模型，循环血miR-451联合超声心动图诊断肺动脉高压的曲线下面积为0.89（795%CI:0.822～0.972，P<0.01），具有较高的诊断价值，与两项指标单独诊断相比，可进一步提高诊断效能。结论：（一）循环血miR-451在小鼠肺动脉高压模型中表达量降低，并且在建模早期阶段即有明显下降。（二）循环血miR-451在肺动脉高压患者中表达量下降。（三）循环血miR-451对肺动脉高压的诊断价值接近于超声心动图，两者联合能进一步提高对肺动脉高压的诊断效能。