朝天椒脉黄病毒侵染性克隆的构建与传毒效率研究

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辣椒脉黄病毒(Pepper vein yellows virus,Pe VYV)属于马铃薯卷叶病毒属(Polerovirus),传播方式仅限于蚜虫传播和通过嫁接传播,病毒发生侵染后,辣椒叶片会出现卷曲,叶脉会产生黄化等症状,影响辣椒品质及产量。本研究针对云南、安徽、浙江等辣椒产区的共263份样品进行了检测,通过转录组高通量分析以及RT-PCR确认,明确云南地区Polerovirus病毒中Pe VYVs的发病率为60.7%;Potyvirus病毒中Chi RSV的发病率为44.0%,Chi VMV的发病率为23.6%;Orthotospovirus病毒中TZSV的发病毒为15.7%。安徽地区Potyvirus病毒中Chi RSV的发病率为75.4%;Tobamovirus病毒中TMGMV的发病率100%。浙江地区Potyvirus病毒中Chi VMV的发病率为发病率60.0%;Polerovirus病毒中Pe VYVs的发病率为60.0%。针对云南地区检出率较高的Polerovirus病毒开展研究,文山地区收集的89份样品中,其中58份检出Pe VYV。同时根据Contig结果以及5’和3’RACE获得一条全长6015nt的新病毒序列,命名为朝天椒脉黄病毒(Pod pepper vein yellows virus,Po Pe VYV),与已报道的Pe VYVs的6个代表种同源性为84.6-87.0%,与烟草扭脉病毒(Tobacco vein distorting virus,TVDV)同源性为87.8%。Po Pe VYV的5’端(5’NCR-P3)与Pe VYV-3(KP326573)具有93.1%的同源性,3’端(RTD-3’NCR)与TVDV具有91.7%的同源性。氨基酸、核苷酸、RDP4以及进化树分析的结果表明,Po Pe VYV在4126-5192nt区段具有一个重组事件,Po Pe VYV可能是由Pe VYV-3和TVDV重组产生的。为确认Po Pe VYV的致病症状,构建以35S驱动的全长侵染性克隆载体p CBPo Pe VYV,利用农杆菌介导法侵染朝天椒和本氏烟,RT-PCR确认病毒发生了系统侵染,纯化后的病毒粒子能够通过电镜观察到直径约25nm的球形粒子,表明Po Pe VYV侵染性克隆已构建成功。为确认病毒介体传播效率,以本氏烟中纯化的Po Pe VYV病毒粒子为研究对象,表明桃蚜获毒率为100%,但接毒效率较低,仅为17-50%。高通量和RT-PCR确认两条番茄丛矮病毒类似相关RNA(Tombusvirus-like associated RNAs,tla RNAs),与TBTDa RNA(Tobacco bushy top disease-associated RNA,EF529625)同源性较高,Po Pe VYV的tla RNA可显著提高Po Pe VYV的传毒效率。
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沙滩具有重要的生态服务功能,同时也是极具经济价值的旅游资源。我国天然、优质沙滩相对较少,而淤泥质潮滩分布广泛,因此,已有部分省市在泥滩上开始建造人工沙滩以满足人们对沙滩休闲旅游的需要。海岸带水动力会与沙滩沉积物相互作用,因此,人工沙滩会对环境变化而进行适应性改变。此外,沙滩游客数量日益增多,过度拥挤和人为造成的环境污染也会逐渐严重。显然,沙滩环境的演变过程是缓慢、持续的,因而值得长期跟踪。本文以位
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