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许多昆虫病原真菌具有腐生和寄生两种生活方式。真菌腐生和寄生生活方式的转变受到碳、氮源等营养因素的调控,其相关基因表达模式也因生活方式的转换发生变化。球孢白僵菌(Beauveria bassiana)是一种重要的害虫生防真菌,研究其生活方式转换的机理,对于了解其营寄生生活或侵染致病相关的基因表达模式具有重要意义。CCR(carbon catabolite repression)是一类功能上保守的真菌碳源代谢阻遏因子,对真菌的腐生和寄生生活方式转换具有重要影响。而有关CCR相关基因在球孢白僵菌中尚无相关研究。为此,本研究从球孢白僵菌中成功克隆了一个碳源代谢阻遏子CCR同源基因BbCrel,通过Southern杂交及表达特性研究,分析BbCrel可能的功能;进一步通过反义RNA技术和超量表达BbCrel基因,研究该基因在球孢白僵菌中的功能,为揭示球孢白僵菌碳源代谢的分子机理提供依据。序列分析表明,BbCrel含有一个1263bp的开放阅读框,编码420个氨基酸,推测其分子量为46.0kDa,等电点为9.91。推测BbCrel蛋白含有两个典型的Cys2His2锌指结构域和穿核识别序列(PNSRRGNK),与金龟子绿僵菌、构巢曲霉、碳色孢腔菌、灰葡萄孢菌和核盘菌的碳源代谢阻遏子的相似性分别为73%、51%、49%、54%和54%。Southern杂交结果表明,BbCrel基因在球孢白僵菌基因组中以单拷贝形式存在。利用Real-Time PCR对其表达特性进行了分析,结果表明,BbCrel的表达受到葡萄糖的调控,该表达特性与上游序列存在两个可能的碳源代谢阻遏因子结合位点(CTCCAG和CCCCGC)相吻合。由此推测,BbCrel基因与球孢白僵菌碳源代谢密切相关。为进一步探索该基因的功能,本文通过超量表达和反义抑制球孢白僵菌的BbCrel基因,分析了转化子在不同碳源条件下的生长、产孢、水解酶基因的表达以及对毒力的影响。主要结果如下:1.BbCrel基因影响球孢白僵菌对不同碳源的利用。在木糖和乙醇作为唯一碳源的条件下,反义抑制BbCrel的转化子生长速率和产孢量明显高于野生型菌株,而超量表达BbCrel的转化子的菌落生长速率和产孢量则明显低于野生菌株;在葡萄糖作为唯一碳源条件下,各菌株之间差异不显著。2.球孢白僵菌降解昆虫体壁Pr1类蛋白酶基因的表达受到BbCrel的调控。在葡萄糖作为唯一碳源的条件下,反义抑制BbCrel的转化子表达降解昆虫体壁Pr1类蛋白酶的活性明显升高,而超量表达BbCrel的转化子的Pr1类蛋白酶活性明显低于野生菌株。3.BbCrel基因是影响球孢白僵菌毒力的重要因子。生物测定结果表明,反义抑制BbCrel明显提高了球孢白僵菌毒力,而超量表达BbCrel的转化子的毒力则显著降低。在1×107个/ml孢子浓度下,而反义抑制BbCrel的转化子对桃蚜的致死中时比野生菌株缩短了10-11小时,而超量表达BbCrel的转化子对桃蚜的致死中时比野生型菌株延长了6-8小时。研究结果表明,BbCrel与球孢白僵菌对不同碳源的利用、毒力相关基因表达以及毒力密切相关。