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背景和目的:皮肤创伤是皮肤组织在遭受外力作用后,出现皮肤离断或缺损,而使正常的皮肤结构及功能受损,是一种皮肤上的物理性损伤。皮肤创伤后修复的动态过程是复杂的,包括了从皮肤细胞结构上的修复至组织层面上的修复。创伤后的再上皮化过程中可发生部分上皮间质转化（Epithelium-mesenchymal Transition,EMT）,导致创伤部位周围细胞的形态变化、细胞间粘附性下降及许多与细胞粘附相关的基因下调。皮肤创伤处的血小板及中性粒细胞可产生一些重要的起始信号分子,如转化生长因子β（Transforming Growth Factor-β,TGF-β）,TGF-β在皮肤创伤后的修复过程中,趋化成纤维细胞并刺激细胞内胶原蛋白及其他基质成分的转录合成,促进纤维化反应,加快皮肤创伤修复过程。但对于角质形成细胞,TGF-β通过Smad3途径可抑制皮肤创伤部位周围表皮中角质形成细胞的增殖与分化,影响皮肤修复过程中角质形成细胞的作用。TGF-β 1是TGF-β的一种亚型,在侵袭性肿瘤、炎症反应、纤维化反应等病理生理条件下可诱导细胞发生EMT。修复过程中还有一些细胞外基质成分的参与,包括胶原蛋白交联酶、胶原蛋白、蛋白多糖、纤连蛋白及基质细胞蛋白等。CCN家族作为基质细胞蛋白成员之一,可编码出一类分泌型的蛋白。该家族的命名来源于最先发现的三个成员:富半胱氨酸蛋白61（Cysteine-rich 61,CYR61/CCN1）、结缔组织生长因子（Connective Tissue Growth Factor,CTGF/CCN2）及肾母细胞瘤过度表达基因（Nephroblastoma Overexpressed,NOV/CCN3）。目前家族中的成员已包含了 CCN1～CCN6,近年来有大量研究对CCN家族在肿瘤、纤维化、皮肤创伤修复中的作用进行了报道,其中在皮肤创伤修复中的研究主要集中在CCN1与CCN4。而作为皮肤组织表皮中含量较多的CCN3,只是报道了其在皮肤组织创伤后的再上皮化过程中表达量下调,但未对CCN3具体参与的机制进行探究。有研究显示,在前列腺癌细胞（PCa）中过表达或敲除CCN3基因后,会使PCa细胞发生EMT相关表型的变化,提示CCN3可能具有影响EMT的作用。本课题通过检测TGF-β1与CCN3对人永生化角质形成细胞（HaCaT）的作用,提示皮肤修复的再上皮化过程中CCN3对EMT的影响,进一步探讨其在皮肤创伤修复当中潜在的机制。方法:1.以HaCaT细胞作为研究对象,采用实时荧光定量PCR检测HaCaT细胞中CCN家族（CCN1～CCN6）mRNA的表达。2.不同浓度的TGF-β1对HaCaT细胞刺激后,使用实时荧光定量PCR检测EMT相关指标（上皮细胞标志物KRT1、KRT13、KRT15,间质细胞标志物CDH2）及在刺激后CCN1～CCN 6 mRNA的表达变化。3.不同浓度重组人CCN3蛋白及TGF-β1共同刺激后,采用实时荧光定量PCR检测HaCaT细胞中与EMT相关指标（上皮细胞标志物KRT1、KRT13、KRT15,间质细胞标志物CDH2）的表达变化。结果:1.CCN家族在HaCaT细胞中的表达采用实时荧光定量PCR检测CCN家族mRNA表达,HaCaT细胞中CCN1表达量最高,其次分别为CCN2、CCN3、CCN6,而CCN4与CCN5表达量则较少。2.TGF-β1对HaCaT细胞EMT相关指标及CCN家族表达的影响重组人TGF-β1蛋白作用于HaCaT细胞后,与对照组相比,HaCaT细胞中上皮细胞标志物（KRT1、KRT13、KRT15）表达量显著下降（p＜0.001）,间质细胞标志物（CDH2）表达量显著升高（p＜0.001）;CCN1和CCN2的表达量显著升高（p＜0.001）,CCN3、CCN6 的表达量显著下降（p＜0.05）,而 CCN4、CCN5无显著性变化（p＞0.05）。3.重组人CCN3蛋白与TGF-β 1共同刺激HaCaT细胞后EMT相关指标表达的变化TGF-β 1与不同浓度重组人CCN3蛋白共同作用于HaCaT细胞后,与仅加入TGF-β 1的对照组比较,HaCaT细胞中间质细胞标志物（CDH2）表达量显著下降（p＜0.01）,而属于上皮细胞的标志物（KRT1、KRT13）表达量显著升高（p＜0.05）。结论:1.在HaCaT细胞中可见CCN1、CCN2、CCN3及CCN6的表达,其中CCN1表达量最高。2.TGF-β1在促进HaCaT细胞发生EMT的同时,可正向调控CCN1、CCN2,负向调控CCN3、CCN6,提示CCN家族中的这些成员可能与EMT相关,并具有调控HaCaT细胞发生EMT的作用。3.CCN3可抑制由TGF-β1刺激HaCaT细胞产生的EMT过程,提示在皮肤创伤修复再上皮化过程中,CCN3的下调可能具有诱导创伤部位角质形成细胞发生EMT的作用,加快ECM合成与细胞迁移,缩短创伤愈合所需时间。