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背景：
miR-206/miR-613在转录后水平调控OATP1B1的表达与功能；LncRNAHOTAIR可作用于miR-206/miR-613调节其靶基因表达，引起对应的功能改变；然而LncRNAHOTAIR对miR-206/miR-613调控OATP1B1是否起作用尚属未知。
目的：
本文章旨在揭示LncRNAHOTAIR通过miR-206/miR-613对OATP1B1表达的调控作用及其分子机制，为阐明OATP1B1调控机制增添新的内容，对临床进一步研究药物反应的个体差异提供理论基础和科学依据。
方法：
1．在HepG2细胞中，瞬时转染miR-206/miR-613mimics及inhibitors，构建miR-206/miR-613过表达和抑制表达细胞模型，采用RT-qPCR、WB技术，研究miR-206/miR-613对OATP1B1mRNA、蛋白表达的影响。
2．在HepG2细胞中，瞬时转染pcDNA3.1-HOTAIR、HOTAIRSmartSilencer和pcDNA3.1、HOTAIRSmartSilencerNC，构建LncRNAHOTAIR过表达和抑制表达细胞模型，采用RT-qPCR、WB技术,研究LncRNAHOTAIR对miR-206/miR-613表达的影响及对OATP1B1mRNA、蛋白表达的影响。
3．在HepG2细胞中，瞬时共转染LncRNAHOTAIR+miR-206/miR-613，进一步确认miR-206/miR-613在LncRNAHOTAIR调控OATP1B1中的作用。
4.在HEK-293T细胞中，采用双荧光报告基因法，瞬时共转染miR-206/miR-613mimics和LncRNAHOTAIR报告基因质粒，研究LncRNAHOTAIR和miR-206/miR-613的特异性结合；瞬时共转染pcDNA3.1-HOTAIR或HOTAIRSmartSilencer与OATP1B1报告基因质粒，研究LncRNAHOTAIR调控OATP1B1表达的分子机制。
结果：
1.与对照组相比，瞬时转染miR-206/miR-613mimics，OATP1B1的蛋白表达量下降38.6%和61.1%；瞬时转染miR-206/miR-613inhibitors，OATP1B1的蛋白表达量增加67.4%和72.8%；而瞬时转染miR-206/miR-613mimics或inhibitors时OATP1B1mRNA表达均无变化；以上结果提示，miR-206/miR-613是在转录后水平表现出明显地降低OATP1B1蛋白表达作用。
2．瞬时转染pcDNA3.1-HOTAIR，miR-206/miR-613mRNA的表达降到对照组的0.45/0.34倍；与对照组相比，OATP1B1蛋白表达量增加103.5%；瞬时转染HOTAIRSmartSilencer，miR-206/miR-613mRNA的表达增至对照组的1.95/1.87倍；与对照组相比，OATP1B1蛋白表达量降低43.1%，而瞬时转染pcDNA3.1-HOTAIR或HOTAIRSmartSilencer，OATP1B1mRNA表达无明显变化。已然显示，过表达或抑制LncRNAHOTAIR亦是在转录后水平调控OATP1B1的；LncRNAHOTAIR对miR-206/miR-613mRNA的表达显现出负性调节作用。以上结果提示LncRNAHOTAIR可能是通过作用于miR-206/miR-613进一步调控OATP1B1表达。
3．瞬时共转染pcDNA3.1-HOTAIR+miR-206/miR-613mimic，与对照组相比，OATP1B1蛋白表达量下降13.3%和18.6%；瞬时共转染HOTAIRSmartSilencer+miR-206/miR-613inhibitor，OATP1B1蛋白表达量增加46.9%和30.9%。由此可见，过表达或抑制LncRNAHOTAIR对OATP1B1蛋白表达的激活或抑制作用，可被miR-206/miR-613mimics或miR-206/miR-613inhibitors部分逆转，切实佐证LncRNAHOTAIR对OATP1B1的调控作用是通过靶向miR-206/miR-613实现的。
4．瞬时共转染miR-206/miR-613mimics和pmir/HOTAIR-WT报告基因，荧光素酶活性下调50%或57%，而突变含有miR-206/miR-613与LncRNAHOTAIR3-UTR的结合位点2186bp-2207bp/2186bp-2205bp的23个碱基，再共转染miR-206/miR-613mimics和pmir/HOTAIR-Mut报告基因，荧光素酶活性无明显变化，表明LncRNAHOTAIR与miR-206/miR-613之间确实存在特异性结合。
pGL/OATP1B1-WT报告基因后，荧光素酶活性上调100%或下调54.3%；而突变miR-206/miR-613与OATP1B13-UTR结合的精确位点590-597nt，再共转染pcDNA3.1-HOTAIR或HOTAIRSmartSilencer和pGL/OATP1B1-Mut报告基因，荧光素酶活性却无明显变化；进一步确定，LncRNAHOTAIR可阻遏miR-206/miR-613在OATP1B13-UTR结合位点上，转录后调控OATP1B1的蛋白表达。
结论：
LncRNAHOTAIR可通过特异性吸附miR-206/miR-613，阻止其作用于特定位点，从而影响OATP1B1蛋白表达水平。
miR-206/miR-613在转录后水平调控OATP1B1的表达与功能；LncRNAHOTAIR可作用于miR-206/miR-613调节其靶基因表达，引起对应的功能改变；然而LncRNAHOTAIR对miR-206/miR-613调控OATP1B1是否起作用尚属未知。
目的：
本文章旨在揭示LncRNAHOTAIR通过miR-206/miR-613对OATP1B1表达的调控作用及其分子机制，为阐明OATP1B1调控机制增添新的内容，对临床进一步研究药物反应的个体差异提供理论基础和科学依据。
方法：
1．在HepG2细胞中，瞬时转染miR-206/miR-613mimics及inhibitors，构建miR-206/miR-613过表达和抑制表达细胞模型，采用RT-qPCR、WB技术，研究miR-206/miR-613对OATP1B1mRNA、蛋白表达的影响。
2．在HepG2细胞中，瞬时转染pcDNA3.1-HOTAIR、HOTAIRSmartSilencer和pcDNA3.1、HOTAIRSmartSilencerNC，构建LncRNAHOTAIR过表达和抑制表达细胞模型，采用RT-qPCR、WB技术,研究LncRNAHOTAIR对miR-206/miR-613表达的影响及对OATP1B1mRNA、蛋白表达的影响。
3．在HepG2细胞中，瞬时共转染LncRNAHOTAIR+miR-206/miR-613，进一步确认miR-206/miR-613在LncRNAHOTAIR调控OATP1B1中的作用。
4.在HEK-293T细胞中，采用双荧光报告基因法，瞬时共转染miR-206/miR-613mimics和LncRNAHOTAIR报告基因质粒，研究LncRNAHOTAIR和miR-206/miR-613的特异性结合；瞬时共转染pcDNA3.1-HOTAIR或HOTAIRSmartSilencer与OATP1B1报告基因质粒，研究LncRNAHOTAIR调控OATP1B1表达的分子机制。
结果：
1.与对照组相比，瞬时转染miR-206/miR-613mimics，OATP1B1的蛋白表达量下降38.6%和61.1%；瞬时转染miR-206/miR-613inhibitors，OATP1B1的蛋白表达量增加67.4%和72.8%；而瞬时转染miR-206/miR-613mimics或inhibitors时OATP1B1mRNA表达均无变化；以上结果提示，miR-206/miR-613是在转录后水平表现出明显地降低OATP1B1蛋白表达作用。
2．瞬时转染pcDNA3.1-HOTAIR，miR-206/miR-613mRNA的表达降到对照组的0.45/0.34倍；与对照组相比，OATP1B1蛋白表达量增加103.5%；瞬时转染HOTAIRSmartSilencer，miR-206/miR-613mRNA的表达增至对照组的1.95/1.87倍；与对照组相比，OATP1B1蛋白表达量降低43.1%，而瞬时转染pcDNA3.1-HOTAIR或HOTAIRSmartSilencer，OATP1B1mRNA表达无明显变化。已然显示，过表达或抑制LncRNAHOTAIR亦是在转录后水平调控OATP1B1的；LncRNAHOTAIR对miR-206/miR-613mRNA的表达显现出负性调节作用。以上结果提示LncRNAHOTAIR可能是通过作用于miR-206/miR-613进一步调控OATP1B1表达。
3．瞬时共转染pcDNA3.1-HOTAIR+miR-206/miR-613mimic，与对照组相比，OATP1B1蛋白表达量下降13.3%和18.6%；瞬时共转染HOTAIRSmartSilencer+miR-206/miR-613inhibitor，OATP1B1蛋白表达量增加46.9%和30.9%。由此可见，过表达或抑制LncRNAHOTAIR对OATP1B1蛋白表达的激活或抑制作用，可被miR-206/miR-613mimics或miR-206/miR-613inhibitors部分逆转，切实佐证LncRNAHOTAIR对OATP1B1的调控作用是通过靶向miR-206/miR-613实现的。
4．瞬时共转染miR-206/miR-613mimics和pmir/HOTAIR-WT报告基因，荧光素酶活性下调50%或57%，而突变含有miR-206/miR-613与LncRNAHOTAIR3-UTR的结合位点2186bp-2207bp/2186bp-2205bp的23个碱基，再共转染miR-206/miR-613mimics和pmir/HOTAIR-Mut报告基因，荧光素酶活性无明显变化，表明LncRNAHOTAIR与miR-206/miR-613之间确实存在特异性结合。
pGL/OATP1B1-WT报告基因后，荧光素酶活性上调100%或下调54.3%；而突变miR-206/miR-613与OATP1B13-UTR结合的精确位点590-597nt，再共转染pcDNA3.1-HOTAIR或HOTAIRSmartSilencer和pGL/OATP1B1-Mut报告基因，荧光素酶活性却无明显变化；进一步确定，LncRNAHOTAIR可阻遏miR-206/miR-613在OATP1B13-UTR结合位点上，转录后调控OATP1B1的蛋白表达。
结论：
LncRNAHOTAIR可通过特异性吸附miR-206/miR-613，阻止其作用于特定位点，从而影响OATP1B1蛋白表达水平。