论文部分内容阅读
目的1.检测NM23-H2在不同分化程度胃癌细胞株中的表达情况,并利用基因转染构建一株NM23-H2高表达的稳定细胞株。2.检测NM23-H2高表达对胃癌BGC-823细胞的增殖、侵袭、迁移及粘附能力的影响。3.检测NM23-H2高表达对细胞粘附相关分子E-cadherin及β-catenin表达量的影响。4.检测NM23-H2高表达对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法1. Western-Blotting法检测不同分化程度胃癌细胞中NM23-H2蛋白的表达量,选取表达量最低的细胞,将带有NM23-H2基因的pcDNA3.1-NM23-H2重组质粒及pcDNA3.1空载体质粒利用Lipofectamine2000转染细胞,利用G418硫酸盐筛选的方法建立NM23-H2高表达细胞株及空载体细胞株。2. Western-Blotting法、RT-PCR及免疫荧光法检测转染后NM23-H2的表达情况,鉴定转染效率。3.台盼蓝快速染色法及MTT法分别检测NM23-H2对细胞的活性及增殖能力的影响。4.利用Transwell小室法检测NM23-H2对细胞侵袭及迁移能力的影响。5.Hoechst33342染色法及MTT法分别检测NM23-H2对细胞之间的粘附及对细胞与细胞外基质之间粘附能力的影响。6. Western-Blotting法检测NM23-H2对粘附相关分子E-cadherin及β-catenin表达量的影响。7.Western-Blotting法检Wnt/β-catenin信号通路相关分子wnt3a、P-GSK3β、 WISP1、CD44及MMP7的表达情况。结果1.NM23-H2在不同分化程度胃癌细胞株中的表达。2.NM23-H2在体外抑制BGC-823细胞的增殖能力。3.NM23-H2在体外抑制BGC-823细胞的侵袭和迁移能力。4.NM23-H2在体外调节BGC-823细胞的粘附能力。5.NM23-H2高表达在体外抑制Wnt/β-catenin信号通路。结论1.NM23-H2对胃癌BGC-823细胞的活性无影响,抑制了细胞的增殖。2.NM23-H2抑制胃癌BGC-823细胞的侵袭和迁移,可能与上调E-cadherin的表达,下调β-catenin的表达,增加细胞之间的同型粘附能力,减弱细胞与基质之间的异型粘附能力有关。3.NM23-H2抑制胃癌细胞的增殖、迁移及侵袭,增强细胞间的粘附能力,抑制细胞与基质之间的异型粘附能力,可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路来发挥作用的。