【摘 要】
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本文研究目的：通过检测菌斑内变形链球菌及表面蛋白和葡糖基转移酶含量，分析变形链球菌及其毒力因子与龋病发生的关系。 研究方法：①通过genbank数据库检索变形链球菌标准菌
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本文研究目的：通过检测菌斑内变形链球菌及表面蛋白和葡糖基转移酶含量，分析变形链球菌及其毒力因子与龋病发生的关系。
研究方法：①通过genbank数据库检索变形链球菌标准菌株UA159及spap和gtf基因序列。对spap和gtf序列进行同源性比较，同时分析序列的发夹和二级结构。将设计完成的毒力因子探针与变形链球菌属标准菌进行杂交，进而检测毒力因子探针的特异性。②选择50例菌斑，10倍系列稀释后涂布于TYCSB和BHI培养基上，厌氧培养48小时后凝胶成像系统进行菌落自动计数。③利用特异荧光探针，结合流式细胞仪，对22例菌斑中变形链球菌及毒力因子含量进行分选检测。④建立gtf扩增标准曲线后，对口腔菌斑中的变形链球菌DNA进行FQ-PCR扩增，确定菌斑中变形链球菌的检出率和gtf拷贝数。利用统计学软件SPSS10.0，对结果进行统计学分析，在α=0.05水平有统计学意义。
研究结果：①毒力因子(spap和gtf)探针和变形链球菌特异性探针与变形链球菌标准株UA159和OMZ175特异性结合，与其它细菌则无结合。②常规培养方法检测发现菌斑内变形链球菌在总菌中的比例在有龋和无龋菌斑中变形链球菌比例分别为59％，51％，差异无统计学意义(P=0.19)。③FISH技术检测变形链球菌的比例在有龋和无龋菌斑中变形链球菌比例分别为49％，32％，差异有统计学意义(P=0.01)。毒力因子spap在有龋和无龋菌斑中平均秩次为15.14和5.13，差异有统计学意义(P＜0.05)；gtf在有龋和无龋菌斑中平均秩次为14.93和5.50，差异有统计学意义(P=0.001)。④FQ-PCR检测有龋菌斑内变形链球菌的检出率为76％，无龋菌斑内变形链球菌检出率为47％，差异有统计学意义(P=0.04)。有龋菌斑中gtf的拷贝数平均秩次为29.70，无龋菌斑中gtf的拷贝数平均秩次为17.35，差异有统计学意义(P=0.04)。
研究结论：①本研究所设计的spap、gtf探针具有较理想的特异性与敏感性，能进一步应用于口腔变形链球菌FISH检测②有龋患者菌斑内含毒力因子变形链球菌在全菌中比例明显高于无龋者，为判断龋病发生的风险性提供实验依据③荧光原位杂交技术快速、准确地分析菌斑细菌分布情况，为口腔流行病学调查提供新的可靠的检测手段。
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