【摘 要】
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目的:顺铂是一种用于治疗多种恶性肿瘤的化疗药物,临床上广泛应用于睾丸癌、卵巢癌、宫颈癌、乳腺癌、膀胱癌、头颈癌、食管癌、肺癌、间皮瘤、脑肿瘤和神经母细胞瘤的治疗。顺铂通过静脉注射给药,进入体循环后主要蓄积在肾脏而引起肾损伤。尽管临床上采用水化疗法减轻顺铂引起的肾毒性,但仍然有40%的患者在接受水化疗法后仍然出现肾毒性,目前尚缺乏有效的降低肾毒性药物或逆转策略,导致顺铂在临床的使用中受限。雷洛昔芬是
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目的:顺铂是一种用于治疗多种恶性肿瘤的化疗药物,临床上广泛应用于睾丸癌、卵巢癌、宫颈癌、乳腺癌、膀胱癌、头颈癌、食管癌、肺癌、间皮瘤、脑肿瘤和神经母细胞瘤的治疗。顺铂通过静脉注射给药,进入体循环后主要蓄积在肾脏而引起肾损伤。尽管临床上采用水化疗法减轻顺铂引起的肾毒性,但仍然有40%的患者在接受水化疗法后仍然出现肾毒性,目前尚缺乏有效的降低肾毒性药物或逆转策略,导致顺铂在临床的使用中受限。雷洛昔芬是一种苯并噻吩类化合物,临床上用于女性绝经后骨质疏松症的治疗以及乳腺癌的预防。之前的研究表明,雷洛昔芬在动物实验中可抑制氧化应激和脂质过氧化,改善缺糖引起的星形胶质细胞所受的氧化损伤,也可通过增加内皮NO合酶活性和减少血管内皮细胞中雌激素受体依赖性活性氧化物的产生,改善大鼠高血压诱导的血管内皮功能障碍和血管损伤。然而,雷洛昔芬是否能减轻顺铂诱导的肾损伤尚不清楚。本研究主要通过以顺铂诱导的人肾小管上皮细胞HK-2为细胞模型和C57小鼠肾损伤模型,通过体内和体外实验探讨雷洛昔芬对于顺铂诱导的肾毒性是否有保护作用,并通过人宫颈癌细胞SiHa、小鼠宫颈癌细胞U14以及U14荷瘤小鼠探究雷洛昔芬对于顺铂抗肿瘤作用的影响。方法:构建顺铂诱导的小鼠急性肾损伤模型,通过HE染色、PAS染色、透射电镜观察小鼠肾组织的形态学特征探究雷洛昔芬对顺铂诱导的小鼠的组织形态学影响;通过氧化指标丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽的检测探究雷洛昔芬对顺铂诱导的肾损伤小鼠的氧化应激的影响;通过血清生化指标肌酐、尿素氮、谷丙转氨酶和谷草转氨酶的检测探究雷洛昔芬对顺铂诱导小鼠的肝肾功能的影响。体外实验中采用CCK-8法检测药物及其联合应用对人肾小管上皮细胞HK-2细胞活力的影响;采用EdU细胞增殖实验检测药物及其联合应用对HK-2细胞增殖的影响;采用光学显微镜观察细胞的生长状态,荧光显微镜观察JC-1/DAPI染色后线粒体膜电位的变化,透射电镜观察细胞线粒体的损伤情况;采用Western Blot检测细胞中凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达变化。采用Western Blot 实验检测肾脏组织和细胞中的ICAM-1、VCAM-1、TNF-α、IL-1 β、IL-6的表达情况,探究雷洛昔芬是否通过减轻炎症反应来改善顺铂诱导的肾损伤。体外实验中采用CCK-8、Annexin V/PI流式细胞仪检测雷洛昔芬及其联合应用对人宫颈癌细胞SiHa和小鼠宫颈癌细胞U14细胞活性和凋亡的影响;构建U14荷瘤小鼠,探究雷洛昔芬对顺铂抗肿瘤作用的影响。结果:（1）在顺铂诱导的急性肾损伤小鼠模型中,小鼠出现肾功能障碍,肾脏指数增加,肾组织形态结构破坏,肾小管上皮细胞线粒体肿胀、线粒体嵴断裂,联合应用雷洛昔芬可改善上述指标及形态;（2）在顺铂诱导的急性肾损伤小鼠模型中,小鼠肾组织的丙二醛含量增加、超氧化物歧化酶活性降低、谷胱甘肽含量增加,联合应用雷洛昔芬可改善肾组织的氧化应激损伤。（3）雷洛昔芬能够降低肾脏摄取转运体OCT2的表达,并且能增加外排转运体P-gp的表达;（4）雷洛昔芬可抑制炎症相关蛋白ICAM-1和VCAM-1蛋白的表达,减少炎症因子TNF-α、IL-6和IL-β的释放。（5）雷洛昔芬可抑制宫颈癌细胞SiHa和U14的增殖,在U14宫颈癌小鼠中可增敏顺铂抗宫颈癌的疗效。结论:（1）雷洛昔芬能够在细胞和小鼠水平改善顺铂所致的急性肾损伤并能增强顺铂对荷瘤小鼠U14宫颈癌的治疗作用。（2）雷洛昔芬通过抗氧化应激、减轻炎症反应以及减少顺铂在肾脏的蓄积从而减轻顺铂所致的急性肾损伤。（3）雷洛昔芬与顺铂联合用药,可作为顺铂化疗保护剂并对宫颈癌的治疗具有增敏作用。（4）本研究对于顺铂肾损伤的保护剂提供了新思路,也为雷洛昔芬这个“老药”在临床的使用补充了新的适应征。
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