目的:探讨核自噬与肝细胞脂变的相关性,从核自噬的新角度阐明肝细胞脂变的发病新机理,以期为非酒精性脂肪性肝病的发病机制及防治提供新的切入靶点。方法:1.体外培养人正常肝细胞WRL68细胞,应用不同浓度的游离脂肪酸(Free fatty acid,FFA)(油酸:棕榈酸=2:1)诱导WRL68细胞脂肪变,选出最佳诱导浓度及时间,建立脂肪肝细胞模型;2.将WRL68细胞分为两组,分别为正常对照组(Control)及FFA诱导肝细胞脂变组;分别于不同时间段用自动生化仪检测甘油三脂及胆固醇的含量,结合油红“O”染色结果,以评估肝细胞脂质沉积程度;3.电子透射镜观察各组肝细胞中核自噬现象;4.应用Western blot技术在不同时间段分别检测胞质中及胞核中LC3、LaminB1蛋白的表达。结果:1、肝细胞脂质沉积结果显示:用不同浓度FFA(0mmol/l、0.25mmol/l、0.5mmol/l)分别处理WRL68细胞6h、24h及48h,诱导肝细胞脂肪变。成功建立肝细胞脂变模型,结合油红染色结果及细胞内TG、TC值,FFA诱导浓度以0.5mM为最佳,且诱导后24h为观察表型现象最佳时间。2、透射电镜下可见:无法很清晰地看到核内的自噬情况。但在胞质中,培养1h观察,与对照组相比,0.5mM FFA处理组出现少量囊状小泡,部分小泡内可见细胞器。在处理24h后,FFA处理组细胞质内含细胞器的囊状小泡基本不可见。3、Western blot检测WRL68细胞中LC3、LaminB1的表达结果显示:在胞核中,经FFA诱导后,LaminB1表达量较control组明显升高,而LC3II表达量较control组比呈下降趋势。在胞质中,LaminB1几乎不表达;在培养6-24h后,FFA诱导组较control组LC3II表达量呈增加趋势,而LC3II/I的值明显呈下降趋势;在培养48h后,FFA诱导组LC3II蛋白的表达量control组降低,但LC3II/I值升高。结论:核自噬受抑参与肝细胞脂变过程,可能成为干预肝细胞脂变的新靶点。