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毕赤酵母作为外源蛋白的表达系统，具有遗传操作简单，培养基成分明确且价格低廉，高效分泌表达能力，翻译后的修饰等突出优点，越来越多的被应用于外源蛋白的表达。低温培养增加外源蛋白产量的报道很多，但其背后的机制并不是很清楚。近年来，错误折叠蛋白与细胞内质网压力和细胞自噬等方面的研究提示，外源蛋白的错误折叠可能是影响蛋白分泌产量的一个主要因素。 在本研究中，我们利用重组表达人白细胞介素-10（rhIL-10）的毕赤酵母菌株作为研究模型。结果显示，在20℃的甲醇诱导条件下得到了较高的rhIL-10的蛋白产量，而在30℃的甲醇诱导条件下rhIL-10的蛋白产量低且酵母细胞死亡率高。进一步的研究结果显示，在30℃的甲醇诱导条件下，酵母细胞的内质网中长时间的积累了较高水平的G3-pro-rhIL10（未成熟的rhIL-10，具有糖基化修饰的信号肽）。并且，伴随着G3-pro-rhIL10在内质网中的滞留，酵母细胞中积累了较高水平的活性氧自由基，内质网中的Ca2+泄漏到细胞质中，较低水平的错误折叠蛋白反应，并出现了内质网特异性自噬(ER-phagy)。相比之下，在20℃的甲醇诱导条件下，内质网中的错误折叠蛋白反应被激活到更高的水平，并且滞留在内质网中的G3-pro-rhIL10很快地被清除了。 本研究阐述了低温培养增加外源蛋白产量的一个机制，即低温培养能够显著地缓解内质网压力，因而避免了酵母细胞的死亡。本研究将有利于酵母菌株的遗传改造和酵母发酵过程的优化设计。