论文部分内容阅读
背景随着外科技术的发展和强有效的免疫抑制剂的临床应用,肝脏移植已经成为治疗慢性终末期肝病、急性肝功能衰竭等疾病的主要治疗方式。临床肝脏移植技术的发展有赖于大量动物实验研究,实验大鼠由于其价格低廉、遗传背景清晰、饲养管理的简捷可控性使其成为众多实验动物的首选。大鼠肝脏移植模型是研究肝脏移植器官保存、缺血—再灌注损伤、血流动力学、免疫抑制剂、移植排斥反应及免疫耐受等方面的理想动物模型。自1973年Lee[1、2]首次建立大鼠肝脏移植模型,经过30多年众多中外学者的改进,现在改良的Kamada“二袖套法”已成为广泛采用的经典术式。在大鼠的品系选择方面,国外大多选用近交系大鼠,如:Lewis—BN、DA—Lewis、PVG—Lewis等,国内由于鼠种、价格等诸多因素,广泛选用封闭群SD与近交系Wistar大鼠进行移植。目的建立大鼠原位肝脏移植急性排斥模型,验证以Lewis大鼠为供体、BN大鼠为受体的组合的排斥强度,为肝脏移植排斥反应或免疫耐受的实验研究提供模型及实验依据。方法⑴.按照改良Kamada法建立近交系大鼠Lewis—BN的肝脏移植模型;⑵.将术后大鼠随机分成两组:实验组( n=15) ,术后未进行特殊的干预;对照组( n=15) ,术后1～7天用FK506 0. 2mg/( kg·d)灌胃。术后4、7和10天各组随机处死3只,收集血清标本与肝脏标本,其余血清标本经尾静脉取血获得;⑶.观察各组剩余6只BN大鼠的生存情况;⑷.将各组的肝脏组织标本HE染色后在光镜下观察病理改变;⑸.将各组所采集的血清样本行肝功能检测; (6).ELISA法检测血清γ-干扰素(IFN-γ)、白介素-10(IL-10)的含量;⑺免疫组化SP法检测肝脏组织内IFN-γ、IL-10的表达;⑻.TUNEL法检测肝细胞凋亡;结果⑴经过对实验准备期100例大鼠肝脏移植手术的熟悉和相互配合,我们施行了共32例Lewis—BN大鼠的肝脏移植手术,手术成功率为93.8%(30/32);⑵术后实验组BN大鼠在7天以后相继死亡,中位生存期为9天,相应的出现了肝功能的恶化:转氨酶、胆红素的升高、白蛋白的下降,移植肝病理提示中-重度的免疫排斥;而FK506处理后的BN大鼠术后中位生存期为51天,较BN大鼠明显延长(P<0.05),肝功能亦好于实验组大鼠,病理提示不明显或轻度排斥反应;⑶术后第7、10天,实验组BN大鼠血清IFN-γ的含量明显高于术前和对照组(P<0.05),移植肝内亦呈阳性表达,而对照组出现了IL-10的高表达,显著高于术前和实验组(P<0.05)。⑷实验组肝细胞凋亡较FK506干预组显著。结论⑴以近交系Lewis大鼠为供体、BN大鼠为受体的组合发生的急性排斥反应强烈而又稳定,是理想的大鼠肝脏移植急性排斥模型;⑵熟练的手术操作、精细的显微外科技术、有效的麻醉以及良好的围手术期管理是成功建立大鼠肝脏移植模型的关键;⑶血清IFN-γ、IL-10的不同水平表达有助于大鼠肝移植后发生急性排斥的诊断。