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研究背景 抗原提呈细胞(Antigen-presenting cell，APC)是能捕捉、加工、处理抗原，并将抗原提呈给抗原特异性淋巴细胞的一类免疫细胞。包括单核／巨噬细胞，树突状细胞等。其中由于树突状细胞(dendritic cell，DC)能激活静息型T细胞发生初级免疫反应，在启动和维持继发性免疫反应上比其它APC如巨噬细胞强100倍；而且，未成熟DC分子表型特殊，能诱导T细胞无能或凋亡，在诱导免疫耐受中也发挥重要作用，成为研究的重点。在免疫反应中，APC只有表达共刺激分子，才能在抗原特异性免疫应答和免疫排斥中引起T细胞亚群的成功活化。B7：CD28／CTLA-4是最重要的共刺激分子之一。B7家族属于免疫球蛋白超家族，至少包括两个成员：B7-1(CD80)和B7-2(CD86)。B7分子以单体形式主要表达于单核细胞、DC和B淋巴细胞等APC上。其配体为CD28／CTLA-4，表达于T细胞表面。未受抗原刺激的APC几乎不表达B7，经活化后CD80和CD86的表达显著上调。APC表面CD80、CD86与T细胞上的配体CD28、CTLA-4结合，传导非抗原特异性的共刺激信号，即第二信号，才能诱发免疫反应。缺乏共刺激信号而仅有抗原特异性信号，将导致T细胞无能甚至凋亡。因此，共刺激分子的表达是APC成熟与否的标志。 眼前房有着独特的免疫反应能力。一方面，对进入的抗原产生免疫反应，如角膜移植后针对移植物产生免疫排斥；另一方面，又具有免疫特惠，抑制炎症反应，以保持良好的中心视力。例如对进入眼前房的抗原产生前房相关免疫偏离。这种免疫应答的特殊性引起了众多研究者的兴趣。目前研究认为：局部的APC捕获并提呈移植抗原，在共刺激分子的作用下激活CD4+T细胞，促使Th1分化，同时分泌IL-2，IFN-Y，TNF一。介导破坏性的迟发性超敏反应在角膜移植排斥反应中起主导作用。前房相关免疫偏离是针对进入眼前房的抗原产生的一种抗原特异性的全身性免疫特惠现象，主要表现为一种固定的模式:Thl介导的迟发性超敏反应被抑制(免疫反应离开了Thl转向了ThZ)。有研究者将同种异体角膜植片植入前房成功诱发ACAID。针对同一种抗原，机体免疫反应最终向哪个方向发展，取决于Thl/ThZ功能性极化。最新的研究表明:APC在决定免疫反应的发展方向(Thl/Th2)上起决定作用。角膜构成前房的前界，角膜上是否存在APC以及与前房特殊的免疫反应能力的关系一直是研究者关注的问题。以往认为，仅角膜缘的上皮存在表达MHC一H的郎罕氏细胞，角膜中央缺乏APC。最近Hamrah证明角膜中央上皮和基质层存在着成熟的和未成熟状态的DC。尚不清楚这些DC的作用以及与前房特殊的免疫应答的关系。本实验通过建立两种相反免疫反应状态的动物模型:角膜移植排斥反应(THI占主导作用)和前房相关免疫偏离(ThZ占主导作用)的大鼠模型，原位检测角膜上表达CD86的APC和表达OX一62的DC的存在，探讨其与角膜移植排斥反应和前房相关免疫偏离之间的关系，分析其作用机制。的检测正常大鼠角膜表达CD86的APC及表达OX一62的DC的分布及意义。建立同种异体角膜移植排斥反应的大鼠模型，检测急性排斥反应角膜上表达CD86的APC及表达OX一62的DC的分布，分析其与角膜移植免疫排斥反应之间的关系。建立前房相关免疫偏离的大鼠模型，检测前房相关免疫偏离诱导成功的大鼠角膜上表达CD86的APC及表达OX一62的Dc的分布，分析其与前房相关免疫偏离之间的 关系。四、对比两种标志物在角膜的表达，探讨其与角膜移植排斥 反应和前房相关免疫偏离之间的关系，研究其作用机制。方法一、正常大鼠角膜CD86的原位表达以及DC的检测。 健康清洁级SD和Wistar大鼠，致死后剪下角膜和 脾脏，常规制作石蜡切片。1.HE染色，光镜下观察正常角膜和脾脏的组织结构。2.免疫组织化学染色(SABC法)检测角膜和脾脏CD86的 表达。(以脾脏为阳性对照)3.免疫组织化学染色(SABC法)检测角膜和脾脏DC(OX 一62标记)的分布。(以脾脏为阳性对照)二、角膜移植术后急性排斥反应角膜CD86的原位表达和DC 的检测及其意义 制作大鼠同种异体穿透性角膜移植模型(Wistar大 鼠为供体，SD大鼠为受体)，术后观察排斥反应指数(Rl) 的动态变化。分别在急性排斥反应的不同时期(术后5 天、术后7一10天、术后2周后)切取角膜(带角膜缘)， 制作石蜡切片。1.HE染色，光镜下观察角膜病理学改变。2.免疫组织化学染色(sABc法)检测角膜cD86的表达。3.免疫组织化学染色(SABC法)检测角膜DC(OX一62标 记)的分布。三、前房相关免疫偏离角膜cD86的原位表达和DC的检测及 其意义 取本实验第二部分与角膜植片同一大鼠供体的脾脏 制作脾细胞悬液，于正常SD大鼠前房内注射，诱导前房 相关免疫偏离。分别于术后1w、Zw、4w进行DTH评价。 切取前房相关免疫偏离诱导成功的大鼠角膜(带角膜 缘)，制作石蜡切片。1.HE染色，光镜下观察角膜病理学改变。2.免疫组织化学染色(SABC法)检测角膜CD86的表达。3.免疫组织化学染色(sABC法)检测角膜Dc(OX一62标 记)的分布。结果一、正常大鼠角膜C