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蛋白质复性技术是生物工程下游的热门技术之一。本实验合成了以精氨酸和肌酸为端基的两种新型胍基蛋白折叠色谱固定相,深入研究了精氨酸型胍基蛋白折叠色谱固定相的色谱性能,并将其应用于含有两对二硫键的重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulating factor,rhG-CSF)的复性纯化研究中。本文主要包括以下4个部分:1文献综述:简要介绍了蛋白质复性的意义及一般过程,详细论述了蛋白折叠液相色谱法,总结了色谱固定相及精氨酸对于蛋白折叠的作用,综述了rhG-CSF复性纯化的研究进展。包括58篇文献。2以硅胶为基质,合成了以精氨酸和肌酸为末端的两种新型胍基蛋白折叠色谱固定相。用5种标准酸性蛋白比较了其色谱分离性能,发现精氨酸型色谱固定相的色谱性能更好。3探讨了在不同pH值,不同流速条件下5种酸性蛋白在精氨酸型胍基色谱固定相上的分离情况;测定蛋白在柱上的质量回收率大于95%;在选用BSA为模型蛋白时测定柱填料的最大吸附量大于46.1mg/g。实验结果表明,该种精氨酸型胍基蛋白折叠色谱固定相具有典型的阴离子交换性质,对标准蛋白具有很好的分离效果,柱容量大,非特异性吸附小。4利用合成的精氨酸型胍基蛋白折叠色谱固定相对在大肠杆菌中表达的rhG-CSF进行了复性纯化,研究了不同的梯度、pH值、脲浓度及流速对rhG-CSF复性的影响。在最优条件下,30分钟内通过一步复性纯化得到了纯度为95.24%,质量回收率为68%的rhG-CSF。损失的rhG-CSF一部分在进样时不保留直接洗脱出来(10%);另一部分沉淀在柱上而无法洗脱,即使在低流速下用0.5mol/L NaCl、8mol/L脲和20mmol/L DTT的强变性剂(4mL)冲洗色谱柱仍然无法很好的将其洗脱下来。