鹅免疫球蛋白λ型轻链基因克隆及其恒定区特异性抗体的制备与应用研究

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免疫球蛋白(Ig)是体液免疫的重要效应分子,在机体免疫和调节中具有重要的作用,有关鹅Ig分子水平方面的研究国内外还未见报道。本研究首先根据GenBank中鸡Ig轻链(ChlgL)(?)口鸭Ig轻链(DuIgL)的cDNA序列设计引物,利用RT-PCR和巢氏PCR相结合的方法首次克隆得到了鹅Ig轻链(GoIgL)的cDNA序列,然后对克隆得到的序列进行了序列比对分析、氨基酸相似性分析、信号肽预测、糖基化分析、3D结构分析和C区进化分析,得出克隆得到的cDNA序列为GoIgL,且属于λ型。其次根据克隆得到的GoIgL序列设计特异性表达引物,采用大肠杆菌表达系统得到了GoIgL恒定区(GoIgCL)的重组蛋白rGoCL,并以此为免疫原制备了抗GoIgCL多抗,分析了抗GoIgCL多抗与禽类IgL之间的抗原抗体反应,进一步证实了禽类IgCL上存在有共同的B细胞抗原表位。最后本研究以Protein A亲和层析纯化的鹅血清Ig免疫BALB/c小鼠,获得2株分泌抗GoIgCL单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1B11和3G9,然后对这两株杂交瘤细胞株进行了生物学鉴定。间接免疫荧光、Western blot(?)口间接ELISA试验结果均表明这两株杂交瘤细胞分泌抗GoIgCL抗体,不与其它物种Ig发生反应,特异性良好。以制备的抗GoIgCL单抗为配体制备的单抗亲和层析柱能纯化出鹅血清中的Ig;用HRP标记后的抗GoIgCL单抗可以检测免疫BSA和GPV病毒样粒子后鹅机体内特异性抗体的消长规律;另外,用抗GoIgCL单抗建立的定量测定鹅Ig含量的ELISA方法,可以检测鹅血清中Ig的含量。综上所述,本研究首次克隆得到了GoIgL基因,并对其进行一系列的分析鉴定;根据克隆得到的GoIgL基因序列,原核表达了恒定区的重组蛋白,以此制备了GoIgCL的特异性抗体,然后对制得的抗体进行了应用研究,为鹅基础免疫学的研究奠定了基础。
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