枯草芽孢杆菌是一种常见的革兰氏阳性菌模式生物,被美国食品药品监督管理局（Food and Drug Administration,FDA）确认为安全的菌（Generally recognized as safe,GRAS）。枯草芽孢杆菌因其生长速度快、蛋白分泌能力强等特点,被广泛应用于工业酶制剂的制造、代谢产品的合成和基础研究中。但是目前枯草芽孢杆菌转录后调控工具缺乏,而且目的基因的表达大多依赖基于抗生素的表达系统,这严重制约了其在食品及医药领域的应用。本研究通过改造枯草芽孢杆菌I型毒素-抗毒素系统,成功构建了同时适用于枯草芽孢杆菌和大肠杆菌的新型转录后调控系统;基于I型毒素-抗毒素系统bsrG/SR4成功构建了枯草芽孢杆菌无抗生素表达系统。主要研究结果如下:（1）基于bsrE/SR5的转录后调控系统的构建。通过SR5与SR4的序列进行比对分析,发现二者同时在核酸序列和二级结构上都有着很高的相似度,基于此成功构建了一套以I型毒素-抗毒素系统bsrE/SR5为基础的s RNA介导的转录后调控系统（Modulation via the small RNA（s RNA）‐dependent operation system,MS-DOS）,基因的抑制效率可达到88.8%。通过对SR5进行了截短表达,结果表明SR5在仅保留终止子序列的情况下也能保持较高的抑制效率（83.8%）。（2）MS-DOS系统的优化与跨宿主应用。通过对OPR区域进行截短,实现了靶基因表达水平的梯度抑制（抑制效率0%—90%左右）。利用截短的OPR即可实现同时对不同基因实现不同强度的表达抑制的效果。接着成功将MS-DOS调控系统应用于大肠杆菌中。通过在大肠杆菌中异源表达枯草芽孢杆菌来源的RNase III,可显著提高MS-DOS系统的抑制效率。同时对OPR进行初步截短研究,同样实现了在大肠杆菌中对于靶基因的梯度抑制。（3）枯草芽孢杆菌无抗生素表达系统的构建与应用。在基因组上整合组成型启动子Pxpa C表达毒素Bsr G,并利用表达质粒组成型表达抗毒素SR4,只有当质粒稳定存在时,细胞才能正常生长;当质粒丢失时,毒素Bsr G形成筛选压力,影响细胞生长。将目的基因构建至表达质粒,即可实现目的基因的无抗生素稳定表达。本研究所构建的无抗生素表达系统,质粒遗传稳定性较好,连续传代100次无明显质粒丢失。该系统成功应用于肝素裂解酶I的高效表达,避免了肝素裂解酶在发酵时受到抗生素污染。