维生素E水平对奶牛乳腺上皮细胞氧化应激状态的影响

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随着人类对氧化应激领域的深切研究,多方面的试验指出,作为抗氧化剂的维生素E在低剂量时具备抗氧化作用,维生素E随剂量增加会朝着促氧化方向转变。所以本试验以奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T)为实验对象,探究不同剂量维生素E和H2O2对其的影响,同时为维生素E在生产实践中的合理使用提供理论参考。本试验主要分为两个部分,均使用MTT比色法检测细胞活率,氧化指标TAS、SOD、CAT、MDA、TOS和ALP通过Elisa试剂盒检测,细胞通透性检测用跨上皮电阻仪测定处理后的细胞TEER值表示,紧密连接蛋白使用荧光定量PCR检测。试验一,通过MTT比色法检测细胞活率后将处理组浓度和时间定为400μmol/L/10h、600μmol/L/6h、900μmol/L/4h、再用浓度为10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L的维生素E缓解2、4、6、8小时对细胞活率氧化指标等数据进行分析。第二部分使用浓度为300μmol/L、600μmol/L、900μmol/L、1200μmol/L、1500μmol/L、1800μmol/L维生素E分别处理细胞2、4、6、8小时,然后基于试验一使用试验一中三组过氧化氢处理组与试验二中维生素E处理组结合,探索两应激源之间碰撞所产生的效果,检测细胞活率、氧化指标和细胞膜通透性。前期第一部分试验结果表明20μmol/L维生素E浓度有效的降低了细胞内MDA、TOS的含量,恢复了细胞活率和细胞内SOD、CAT的产出,且不同浓度时间造成的氧化应激所需要的维生素E缓解时间不同,高浓度过氧化氢造成的氧化应激所需要的维生素E缓解时间更长,反之低程度伤害所需要的缓解时间更短。高剂量的维生素E可以对细胞造成氧化损伤,并且细胞内MDA、ALP含量显著升高,抑制了SOD、CAT的产生量,细胞内ALP的增加使TEER值急剧下降,细胞膜破坏从而引起了细胞死亡。从两应激源结合的细胞存活率氧化指标等实验结果可以看出,两应激源结合不论添加顺序先后均极显著(p<0.01)低于对照组,且高于单独添加对于细胞的伤害。总而言之不同程度的氧化损伤所需要的维生素E缓解时间不同,而且高剂量的维生素E可以对细胞造成氧化损伤,这种损伤会随着时间的延长而持续进行,且两应激源结合会对细胞造成更大程度的伤害。
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