论文部分内容阅读
目的:肿瘤细胞表面唾液酸结构与细胞间的粘着、接触、抑制,癌的转移、扩散及肿瘤的抗原性有密切的关系。本文通过α2,3唾液酸酶的特异性剪切作用,初步探讨细胞表面α2,3唾液酸结构对胃癌细胞AGS的增殖以及迁移的影响,并初步研究AGS细胞与α2,3唾液酸结构相关的糖基转移酶在mRNA水平的表达。方法:(1)根据α2,3唾液酸转移酶家族不同的6个成员的不同序列,利用软件设计不同的RT-PCR引物,分别检测6个基因在胃癌细胞AGS mRNA水平的表达情况。(2)依据α2,3-唾液酸酶处理的浓度的不同,通过MTT检测AGS细胞的生长曲线的改变情况。(3)依据α2,3-唾液酸酶处理的时间与浓度的不同,通过划痕修复实验检测AGS细胞迁移能力的改变情况。(4)利用荧光标记的对α2,3唾液酸结构具有特异性的植物凝集素Maackia amurensis lectin I (MAL I),依据α2,3唾液酸酶处理胃癌细胞AGS的浓度的不同,通过流式细胞仪检测AGS细胞表面的平均荧光强度的改变情况。结果:1、RT-PCR结果显示,在胃癌细胞AGS中,α2,3唾液酸转移酶家族的6个成员有两个在mRNA水平表达,分别是ST3Gal1和ST3Gal4。2、AGS细胞的生长曲线表明,在AGS细胞生长到第四天即96小时的时候,α2,3唾液酸酶活性浓度分别为100mU/ml、150mU/ml时,α2,3唾液酸酶的抑制活性最明显,同时,AGS生长曲线的周期与对照组相比明显缩短。3、AGS细胞的划痕修复实验表明,随着α2,3唾液酸酶的活性从200mU到600mU/,AGS细胞的迁移能力显著上升,活性浓度为600mU时AGS细胞的迁移能力上升最明显。结论:在胃癌细胞AGS中,至少有2个α2,3唾液酸转移酶家族的成员在mRNA水平上有表达。并且,AGS细胞表面的α2,3唾液酸结构与其生长曲线存在相关性,在一定程度上支持AGS的生长,并且与细胞生长周期相关,因为在α2,3唾液酸酶处理之后,AGS细胞的生长周期明显缩短了。同时,细胞表面的α2,3唾液酸结构也影响到AGS的迁移能力,因为在α2,3唾液酸酶处理之后,AGS细胞的迁移修复能力明显增加,提示细胞表面的α2,3唾液酸结构可能参与了细胞间的信号传递,从而影响到细胞的生物学行为。