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目的:恶性胶质瘤是人脑最常见的恶性肿瘤,但目前无论手术治疗还是放化疗,治疗效果都不是很理想,因此基因治疗方案越来越受学者们关注。单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙氧鸟苷(HSVtk/GCV,herpes simplex virus thymidine kinase/ganciclovir)肿瘤自杀基因治疗系统具有显著的杀伤肿瘤作用,但由于单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSVtk)基因在体转导效率很低,而利用体外导入HSVtk基因又一直没有找到合适的载体细胞,因此直接阻碍了该治疗方案在临床上的进一步应用。近年来,有研究表明骨髓间充质干细胞具有在基因治疗中携带和运送治疗基因的能力,而且已经发现了携带了HSVtk基因的骨髓间充质干细胞(BMSC-tk)与不同种系的胶质瘤细胞之间存在着较好的旁观者效应。本研究旨在进一步探讨TK骨髓间充质干细胞(BMSC-tk)的体外抗肿瘤作用。方法:C6(大鼠胶质瘤细胞)的培养。原代BMSC(大鼠骨髓间充质干细胞)的提取,形态学鉴定及培养。Transwell小室迁移实验来验证BMSC向C6的定向迁移能力。pEX-4-herpesvirus进行外源性HSVtk基因对C6和BMSC细胞转染,并观察两种细胞的转染效率。细胞增殖测试实验(Cell counting kit-8,CCK-8)法检测C6-tk(TK大鼠胶质瘤细胞)及BMSC-tk细胞对GCV的体外敏感性。C6与BMSC-tk共培养在不同浓度(0~100ug/ml)GCV(更昔洛韦)的条件培养液,用CCK-8分析法检测存活的细胞数量来评价其抗肿瘤活性。结果:培养过C6细胞的条件培养基组的穿膜细胞数显著高于Control(新鲜培养基)组(P<0.001)。C6的转染效率超过20%,而BMSC的转染效率还不到10%,且荧光强度较弱。C6-tk及BMSC-tk的细胞存活率随GCV浓度增大均出现明显的下降趋势;与Control组相比,GCV浓度大于0.1ug/ml时C6-tk的细胞存活率开始下降,而BMSC-tk细胞是当GCV浓度大于0.3ug/ml时开始下降;当GCV浓度增至10ug/ml时C6-tk和BMSC-tk细胞的存活率下降均最为显著(P<0.001),而继续增大GCV浓度,细胞存活率都再无显著下降(P>0.05)。GCV浓度为1、3、10、30、100ug/ml时BMSC-tk+C6的细胞存活率均有显著下降(P<0.05、P<0.01、P<0.001、P<0.001、P<0.001)。其中10ug/ml组BMSC-tk+C6的细胞存活率下降最为显著,而继续提高GCV的浓度后BMSC-tk+C6的细胞存活率较10ug/ml组不再明显下降。在GCV浓度为10ug/ml时BMSC-tk细胞与BMSC-NC细胞相比下降的OD值显著低于BMSC-tk+C6细胞与BMSC-NC+C6细胞相比下降的OD值(P<0.001)。结论:1.BMSC对胶质瘤细胞具有明显的定向迁移能力。2.C6-tk细胞在体外条件下对GCV有显著的敏感性,且敏感性最为显著时的最低GCV浓度为10ug/ml;3.BMSC-tk细胞在体外条件下对GCV有显著的敏感性,且敏感性最为显著时的最低GCV浓度为10ug/ml;4.BMSC-tk在体外条件下对C6细胞存在明显的杀伤作用,且杀伤作用达到最大时的最低GCV浓度为10ug/ml;