前言 抑郁症的发病机理甚为复杂，诱发原因较多，多认为是由于神经递质紊乱，主要是5-HT缺乏所致的生化代谢异常、神经内分泌功能失调。因此，目前抑郁症的治疗也主要是针对单胺类神经递质紊乱，采用合成抗抑郁药进行治疗。但合成抗抑郁药大多只针对其中某一种或两种神经递质，存在抗抑郁谱窄、副作用大及易复发等缺陷，单一用药难以取得满意疗效。 研究表明，慢性应激与抑郁症的发病密切相关。慢性应激时，下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴)持续激活，体内尤其是中枢神经系统内的生化改变可导致大脑器质性损害。 因此，对抑郁的治疗不应单纯针对神经递质的改变，而应立足于多层次、多途径、多靶点的治疗，减轻神经元损伤、保护脑组织也应当是抑郁治疗的一个新的重要的治疗靶。 本研究旨在探讨抑郁大鼠海马的免疫组织化学改变，研究银杏叶提取物(EGb)及合成抗抑郁药盐酸文拉法辛(Venlafaxine)对抑郁大鼠的抗脑损伤及神经元保护作用。 实验材料 一 实验动物 采用雄性青年Wistar大鼠84只，平均体重180～220g，由中国医科大学实验动物中心提供。 二 主要试剂 兔抗大鼠nNOS多克隆抗体、兔抗大鼠BDNF多克隆抗体及SABC免疫组化试剂盒，购于Boster公司。 EGb购于江苏扬于江药业集团，Venlafaxine购于美国Wyeth公司。三 实验仪器 YSD＊G型药理生理实验多用仪，超声粉碎机，高速离心ML，722型光栅分光光度计，Meta Morph／Cool Snapf／Ax70图象分析系统。 实验方法一 动物分组 大鼠适应环境后采用Open丘eld tk测定行为并称重。依Open上eld法评分将大鼠随机分为对照组、抑郁模型组和治疗组。对照组和抑郁模型组各14只，治疗组56只。 对照组记为A组，14只，不施加任何刺激；抑郁模型组记为B组，14只，共接受ZI大各种不同的应激。A组及B组在实验第门、ZI无时，采用快速断头法分别随机处死7只，分别记为A；、A。组及B；、B。组。 治疗组的 56只大鼠同 B组大鼠一起接受 ZI大各种不同的应激，之后再次行 Open6 法评分，依得分将治疗组大鼠随机分为C、D、E、F 4组，每组 14 只。 在接受ZI大综合应激后，C组每日正常进食、水；D组给予银杏叶提取物（EGb）40mg／（kg·d）；E组给予 VenlafaXinel sing／（kg·d）；F组给予 EGb 40mg／（kg·d）＋Venlafaxine sing／（k·d）。共给药 28大。CW组在给药第 14、28天时各随机处死 7只，分别记为C；、C。，D；、D。，E；、E。及F；、FZ组。二 动物抑郁模型的制备 成年 Wstar雄性大鼠，休重 180亿，每笼饲养 1只，对其 、2－进行对大各种不同的刺激，包括热应激、冰水游泳、摇晃、禁食。禁水、足底电击、夹尾等，每种刺激2刁次。三 取 材 各组大鼠在处死前均采用Open寸ield tk测定行为学改变。断头后快速冰上取脑，一侧解剖分辨并剥离出海马，称重后匀浆，贮存于下0℃中待检；另一侧修块后置于4℃ 4％多聚甲醛中固定待测；同时留取血清置下0℃中待检。四 海马中神经元型一氧化氮合酶问阿OS）及脑源性神经营养因子 （BDWh）蛋白的叙定 采用免疫组化方法检测，图象分析阳性神经元的切面面积比及平均目标灰度值。五 海马及血清中一氧化氮（NO）的测定 采用改良镀铜绩还原法，722型光栅分光光度计比色测定。六 统计学处理 实验结果一 开场行为观测 中央格停留时间B组均较A组增多，尸＜0刀1。与C组相比，F组中央格停留时间显著减少，尸刀刀1。与F组相比，C、D组有显著差异，尸＜0刀1～0刀5。穿越格数、竖立次数及修饰次数B组均较A组减少，尸叩刀1。与C组相比，F组上述各项显著增加，内0＊1～0＊5；D、E组仅穿越格数增加，尸＜0＊1～0＊5。粪便粒数B组较A组增多，尸＜0刀1；与C组相比，F组粪便粒数显著减少，尸阿对1。B、C两组各项均无显著差异。 －3－H 海马中＂NOS及B咖蛋白的表达 1海马中nNOS蛋白的表达B组nNOS阳性神经元平均灰度比对照组（A组）降低，P＜0．of。与 C组相比，D、F组 ＂NOS阳性神经元平均灰度均显著增加，厂对＊；F组面积比增加，NO刀5；B组各项均无显著差异。与F组相比，E组平均灰度、面积比均低，尸＜0．01～0刀5。 2海马中BDNF蛋白的表达B组BDNF阳性神经元平均灰度比对照组（A组）增加，尸叩刀1，民组面积比低于A组，尸功力5。与C组相比，E、F组＊DNF阳性神经元平均灰度均减少，尸＜0刀1；DZ、F组面积比增加，卢功力 l0刀5；B组各项均无显著差异。与F组相L，D组平均灰度增加，尸＜0＊5，DZ、E组面积比减少，H 0刀1～0．05。三 海马及血清中NO含量变化 1海马中＊O含量B组比A组＊O含量增多，尸＜0刀1。q。F组比C组＊O含量减少，厂对对1刀刀5；B组与