【摘 要】
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目的:在项目支持下,基于文献研究,建立急性肝衰竭（Acute liver failure,ALF）动物模型,观察解毒化瘀颗粒（Jiedu Huayu granule,JDHY）对急性肝衰竭大鼠肝细胞再生的干预作用,基于JNK信号通路,探讨解毒化瘀颗粒促进肝再生、拮抗肝衰竭的部分疗效机制。方法:SPF SD大鼠50只,雄性,体重180-210g,适应性喂养一周。实验大鼠随机分为3组:对照组（Cont
【基金项目】
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2018年广西自然科学基金（项目批准号:2018JJA140126）；
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目的:在项目支持下,基于文献研究,建立急性肝衰竭（Acute liver failure,ALF）动物模型,观察解毒化瘀颗粒（Jiedu Huayu granule,JDHY）对急性肝衰竭大鼠肝细胞再生的干预作用,基于JNK信号通路,探讨解毒化瘀颗粒促进肝再生、拮抗肝衰竭的部分疗效机制。方法:SPF SD大鼠50只,雄性,体重180-210g,适应性喂养一周。实验大鼠随机分为3组:对照组（Control）、模型组（Model）、解毒化瘀颗粒干预组（JDHY）,其中对照组10只,模型组和解毒化瘀颗粒干预组各20只。除对照组以外,均予D-Gal N 600mg/kg联合LPS 20ug/kg大鼠腹腔注射一次成模。中药于造模前72h开始灌胃（ig）,一直延续至成模后72h,每天2次,间隔12h,模型组给予等量生理盐水代替。在造模成功后72h,剖腹行腹主动脉采血,剖取肝脏,HE染色后观察各组肝组织病理形态变化,ELISA检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、总胆红素（TBIL）、总胆汁酸（TBA）的水平,免疫组化（Immunohistochemistry,IHC）检测增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达水平,RT-PCR检测肝组织JNK、c-jun m RNA表达水平,Western Blot检测JNK1、JNK2、c-jun及p-JNK1、p-JNK2、p-c-jun等蛋白表达水平。结果:（1）HE染色:在对照组中,显微镜下可以看到完整的肝小叶,肝细胞围绕中心静脉放射状排列,肝索排列规则有序,肝细胞无炎性浸润、变性和坏死,无胆汁淤积;模型组在显微镜下可见大部分肝小叶结构受损,肝索排列不整齐,肝组织间隙可见大量炎性细胞浸润,可见大量扩张的毛细胆管,肝细胞呈大块或亚大块状坏死,坏死率达70-80%,仅见少部分正常肝细胞;中药组可见部分肝小叶结构受损,肝索排列欠整齐,伴不同程度肝细胞肿胀、变性,可见部分扩张的毛细胆管,门静脉区可见不同程度的炎性细胞浸润和斑/片坏死,坏死率为40-50%,与模型组相比,中药组病理损伤明显减轻。（2）ELISA:与Control组比较,Model和JDHY组ALT、AST、TBIL、TBA均显著升高,差异有统计学意义（P＜0.05）。与Model组比较,JDHY组ALT、AST、TBIL、TBA均显著下降,差异有统计学意义（P＜0.05）。（3）IHC:与Control组比较,Model组PCNA的表达量显著减少,差异有统计学意义（P＜0.05）,JDHY组PCNA的表达量减少,差异无统计学意义（P＞0.05）。与Model组比较,JDHY组PCNA的表达显著增高,差异有统计学意义（P＜0.05）。（4）RT-PCR:与Control组比较,Model组肝组织中JNK和c-jun m RNA表达均升高,差异有统计学意义（P＜0.05）。与Model组比较,JDHY组JNK、c-jun m RNA表达下降,差异无统计学意义（P＞0.05）。（5）Western blot:与Control组比较,Model组肝组织JNK1、JNK2和c-jun蛋白含量均升高,差异有统计学意义（P＜0.05）,JDHY组JNK1、c-jun蛋白含量升高,差异有统计学意义（P＜0.05）,JNK2蛋白表达含量升高,差异无统计学意义（P＞0.05）。与Model组相比,JDHY组JNK1和JNK2蛋白含量均下降,差异有统计学意义（P＜0.05）,c-jun蛋白含量下降,差异无统计学意义（P＞0.05）。与Control组比较,Model和JDHY组肝组织中p-JNK1、p-JNK2、p-c-jun蛋白含量均显著升高,差异有统计学意义（P＜0.05）。与Model组比较,JDHY组p-JNK1、p-JNK2、p-c-jun蛋白含量均明显下降,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论:（1）解毒化瘀颗粒可能通过抑制JNK/c-jun磷酸化,使JNK/c-jun信号通路失活,促进PCNA的表达、增强肝细胞再生、拮抗肝衰竭。（2）解毒化瘀颗粒“祛瘀生新”抑制炎症损伤、促进肝细胞再生的科学内涵,可助推中医药防治肝衰竭的临床应用。
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