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蜂花粉是蜜蜂生存的重要营养源,蜂花粉的数量和品质可影响蜜蜂的繁殖、幼虫的生长及寿命等。由于蜂花粉含有多种复杂的成分,诸如氨基酸、油脂、碳水化合物、矿物盐、植物杀菌素及抗生素等,因此蜂花粉对于人类的健康及营养保健也具有非常重要的价值。蜂花粉提取物已被应用于治疗慢性前列腺炎等疾病,并被认为其具有抑制男性荷尔蒙激素的作用。此外,蜂花粉还具有调节肠道功能、有助于心血管系统、改善皮肤、视觉等有益的功效作用。
蜂花粉化学成分的种类和含量水平是其发挥各种生理保健活性作用的物质基础,也是评价不同种类、不同产地、不同粉源蜂花粉的品质及其开发价值的重要参数。青藏高原,尤其是青海省海北州门源地区的油菜种植面积大,油菜蜂花粉资源相当丰富。为使该资源得以良好的开发和深度利用,有必要对该种蜂花粉进行深入详细的研究。
本学位论文工作通过系统的研究青藏高原油菜蜂花粉中的黄酮、活性油脂、多糖这三种主要成分,取得了以下重要研究成果和结论。
1、本论文研究考察了蜂花粉总黄酮的几种不同提取方法,采用正交实验确定了加热回流法的最佳工艺为:温度80℃,用65％乙醇按料液比1:12回流提取4次每次2 h,测得其含量为35.18 mg/g;超声提取法的最佳工艺为:温度40℃,用1:12的料液比,超声提取25 min,超声功率100 W,测得含量为31.27 mg/g;冷浸提取法测得总黄酮含量为32.33 mg/g;索氏提取法测得总黄酮含量38.06 mug。
2、考察了7种大孔吸附树脂对该蜂花粉总黄酮的纯化富集效果,结果筛选出AB-8型树脂具有较高的吸附容量和吸附率。通过动态吸附与解吸实验确定山其最佳纯化富集工艺为:上样溶液浓度0.91 mg/Ml,Ph为5,吸附流速2.5 Ml/min,洗脱采用50%的乙醇以1 Ml/min的流速洗脱3 BV。
3、通过考察缓冲溶液Ph值、离子浓度、有机添加剂、电压、温度等因素的影响,建立了一种简便、快速的高效毛细管区带电泳分离测定芦丁、槲皮素、山奈酚、异鼠李素这四种黄酮的分析方法,在确定的最佳分离分析条件下,即35mmol/L硼砂缓冲溶液,Ph8.4,10%乙腈作为添加剂,20℃,25 Kv,四种黄酮在14 min内实现了基线分离。利用此方法,实验进一步测定了青藏高原油菜蜂花粉中黄酮苷元的组成与含量。
4、采用超临界CO2萃取技术提取了青藏高原油菜蜂花粉油脂,以正交试验考察了萃取温度、萃取压力、萃取时间等实验参数,并确定了青藏高原油菜蜂花粉油脂的超临界CO2萃取最佳工艺,即萃取温度45℃;萃取压力35 Mpa;萃取时间90 min,二氧化碳的流量40 Kg/h。
5、以TSPP作为柱前衍生试剂,建立了高效液相色谱分离-荧光检测法同时分析测定30种饱和及7种不饱和脂肪酸的方法,并以此方法分析对比了青藏高原油菜蜂花粉超临界CO2萃取油脂和石油醚热回流提取油脂中脂肪酸种类及含量差异。
6、确定了青藏高原油菜蜂花粉多糖及其水解液的制各方法及其实验参数,并以NMP作为柱前衍生试剂,建立了9种单糖的高效液相色谱分离-DAD检测及柱后在线质谱分析方法(HPLC-DAD-MS),运用此新建方法对青藏高原油菜蜂花粉多糖中水解单糖进行了定性和定量研究。
7、分别考察了青藏高原油菜蜂花粉中的黄酮、多糖、油脂对超氧阴离子自由基(O2-·)、二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)和羟自由基(·OH)的体外清除作用,以Vc作为阳性对照,结果表明:这三种蜂花粉中的主要成分均具有不同程度的体外自由基清除活性。