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背景和目的卵巢癌是最常见、死亡率最高的妇科恶性肿瘤,多数患者发病早期无明显症状和体征,由于缺乏经济简便、高特异性及敏感性的筛查方法,因此给卵巢癌的早期发现和诊断带来困难。由于70%的患者确诊时多已发生广泛转移,治疗效果差,预后不良,5年生存率徘徊在30%左右,成为严重危害我国女性身心健康的疾病之一。目前国内外肿瘤研究领域的热点多集中在细胞内信号转导通路,已知多种生长因子参与细胞内信号的传递,其中对生长因子介导的细胞内信号转导通路研究较为广泛。在生物界众多发挥作用的生长因子中,肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor, HGF)最早被人们熟知,参与调节多种生理活动。HGF是一种多肽生长因子,其特异性受体为c-Met, HGF与受体结合后,可将特定的刺激信号传导入细胞内,通过酪氨酸残基磷酸化,启动细胞内多通路信号转导,通过级联反应调节下游某些特定分子的表达,从而引起相应的生物学变化。聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶-1 [Poly(ADP-ribose)polymerase-1,PARP-1]是一种高度保守的核酶,存在于大多数真核细胞内,在多种生物学效应中发挥重要作用,如维持DNA完整性、基因转录、细胞周期、染色体功能、基因组稳定和细胞死亡等方面。研究发现,细胞中PARP-1的表达与多种机制有关,其中包括生长因子、癌基因及抑癌基因等多种机制。目前关于HGF及PARP-1在卵巢癌SKOV-3细胞中的表达及HGF、PARP-1在卵巢癌细胞侵袭转移机制中表达的相互关系,国内外尚无报道。本研究拟通过探讨HGF对卵巢癌SKOV-3细胞中PARP-1表达水平的影响,以及HGF/PARP-1通路在调控SKOV-3细胞侵袭转移中的作用,旨在为研究卵巢癌的侵袭转移机制及其针对性治疗提供新的理论依据。方法1.细胞培养：细胞分组：(1)正常对照组：RPIM-1640培养液(含10%胎牛血清)进行培养；(2)HGF刺激组：加入适量重组人HGF,使培养液中HGF最终浓度分别为10ng/mL,20ng/mL,40ng/mL,60ng/mL,80ng/mL;刺激时间分别为6h,24h,48h。2. Transwell检测不同浓度HGF对卵巢癌SKOV-3细胞侵袭力的影响。3. 实时荧光定量PCR检测HGF不同浓度及作用时间对卵巢癌SKOV-3细胞PARP-1mRNA的表达。4. Western-blotting检测HGF不同浓度及作用时间对卵巢癌SKOV-3细胞PARP-1蛋白表达的影响。5. 慢病毒转染卵巢癌SKOV3细胞及获得稳定转染株,外源性40 ng/mL HGF处理不同转染组细胞24h,同时设置无HGF处理的对照组。实验分组如下：空白对照组；HGF组；PARP-siRNA组;HGF+PARP-siRNA组；NC-siRNA组；HGF+NC-siRNA组,进行以下实验,以检测在HGF调控下,PARP-1对SKOV-3细胞体外侵袭力的影响。6. RT-PCR检测稳定转染组细胞中PARP-1mRNA的表达。7. Western-blotting检测各组细胞中PARP-1蛋白的表达。8. Transwell实验检测HGF调控的不同实验组细胞体外侵袭力的影响。9. ELISA法检测HGF调控的SKOV-3细胞中,PARP-1对细胞分泌MMP-2含量的影响。结果1.HGF可促进SKOV-3细胞的体外侵袭能力。2.HGF可上调SKOV-3细胞中PARP-1的表达。3.干扰PARP-1的表达可以部分抑制HGF诱导的PARP-1表达水平。4.干扰PARP-1的表达可以部分抑制HGF诱导的SKOV-3细胞侵袭能力的增加和MMP-2含量的增加。结论HGF诱导卵巢癌细胞发生侵袭转移的作用机制,可能和PARP-1介导MMP-2上调的信号途径有关。