【摘 要】
：
Levan型果聚糖是一种以β-（2,6）果糖苷键和β-（2,1）果糖苷键连接形成的果聚糖。因其优良的性质和功能而广泛应用于食品、医药、纳米材料、环境、化妆品、工业等领域。Levan在自然界中主要存在于微生物和植物。采用传统的分离方法纯化困难且成本过高,通过酶法合成levan相对简单高效、成本低廉,因此受到了学者的广泛关注。果聚糖蔗糖酶（levansucrase）能够以蔗糖为底物在适当的条件下合成l
论文部分内容阅读
Levan型果聚糖是一种以β-（2,6）果糖苷键和β-（2,1）果糖苷键连接形成的果聚糖。因其优良的性质和功能而广泛应用于食品、医药、纳米材料、环境、化妆品、工业等领域。Levan在自然界中主要存在于微生物和植物。采用传统的分离方法纯化困难且成本过高,通过酶法合成levan相对简单高效、成本低廉,因此受到了学者的广泛关注。果聚糖蔗糖酶（levansucrase）能够以蔗糖为底物在适当的条件下合成levan。目前已知的果聚糖蔗糖酶主要存在于微生物中,而直接从微生物中提取产量难以满足实际应用,因此通过基因工程手段构建高效表达果聚糖蔗糖酶的重组菌株日益成为研究热点。乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）是一种安全的食品级微生物,其全基因组小,遗传背景清晰,较易进行基因改造,是分泌异源蛋白良好的细胞工厂。本文以解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens BH072）的果聚糖蔗糖酶基因sac B为研究对象,在乳酸乳球菌（L.lactis）中构建Ba-Sac B的异源重组表达系统。此外,还构建了三个Ba-Sac B的突变体酶,并对Ba-Sac B及突变酶的性质进行了探究。随后将Ba-Sac B及其突变体用于levan的合成,并对酶法合成levan的条件进行了相关优化。实验结果如下:（1）提取B.amyloliquefaciens基因组,将其作为PCR模板,扩增出sac B基因,通过融合PCR与信号肽SPusp45融合,得到的融合片段SPusp45-sac B分别与含有启动子Pp5的组成型表达载体和启动子Pnis A的诱导型表达载体连接,在乳酸乳球菌（L.lactis）中构建重组质粒p NZ8048-Pp5-SPusp45-sac B和p NZ8048-SPusp45-sac B,并成功分泌了重组Ba-Sac B。通过对生长曲线的绘制发现Ba-Sac B的表达对菌株的生长没有影响。经过表达条件的优化,得到了蛋白表达的最佳条件:组成型系统(p NZ8048-Pp5-SPusp45-sac B)菌株的最佳发酵时间为36 h,诱导型系统(p NZ8048-SPusp45-sac B)菌株的最佳诱导时间为48 h,最佳诱导剂nisin浓度为2 ng/m L。其中诱导型菌株(p NZ8048-SPusp45-sac B)获得了最大的Ba-Sac B表达量,浓度为225.2±0.6 mg/L,重组Ba-Sac B在40℃、p H 6、10 m M Ca2+存在的情况下最高比酶活为230.93±1.5 U/mg,Ba-Sac B的最佳存贮条件为40℃、p H 6。（2）提取p NZ8048-SPusp45-sac B质粒,将其作为模板,运用PCR定点突变技术对位于sac B基因第313个氨基酸位置的谷氨酸进行突变,成功构建了突变体E313L、E313F和E313V。结果显示突变不影响蛋白正常的分泌表达和菌株正常的生长。经过酶学性质的测定,发现突变体E313F的最适温度提高了15℃,在贮存24 h后,E313F仍保持原酶活性的61.77%（40℃）、59.73%（45℃）和58.99%（50℃）,比野生型Ba-Sac B贮存24 h后的酶活力均高出25%以上,在不同p H的溶液中贮存8 h后,E313F在p H 3-5缓冲液中的相对酶活性明显高于其他三种酶。由此可见,突变体E313F的温度稳定性、耐酸性等都得到了明显提升。（3）对levan的酶法合成条件进行优化。对酶的种类、蔗糖浓度、温度、p H、Ca2+浓度和反应时间等因素进行优化,采用薄层色谱法（TLC）对levan进行定量,得到了最佳反应条件如下:50μg/m L E313F酶液、200 g/L蔗糖、15 m M Ca2+、温度为55℃、溶液p H为6、反应时间为14 h。
其他文献
本文对国家药品监督管理局发布的《化妆品生产质量管理规范》作了较全面的介绍，内容包括其法律依据、实施宗旨、意义、特点、重点内容、实施后行业面临的机遇与挑战等，为化妆品从业人员及监督检查人员更好地学习和理解《化妆品生产质量管理规范》提供参考。
梭子蟹（Portunus trituberculatus）是全球重要的海产经济蟹类之一,因其营养丰富、风味独特而广受世界人民喜爱。然而地理差异和生长环境的不同,导致不同产区的梭子蟹营养品质和感官品质有所差异。随着梭子蟹产业发展水平进一步提升,对梭子蟹品质的深入研究成了一个重要的研究课题。此外,蟹糊作为一款以梭子蟹为原料制备的生腌食品,优化其加工工艺不仅可以提高梭子蟹产品的附加值,更有利于扩大产业发
百里醌（Thymoquinone,TQ）是从黑种草的草籽中提取的主要生物活性物质,具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等功效。炎症性肠病（Inflammatory bowel diseases,IBD）与肿瘤作为常见人类疾病近年来呈现出发病率高、危害性大且难以根治的特点,临床药物治疗存在很多副作用,因此,迫切需要安全有效的新干预手段。TQ作为功能多样的生物活性物质,对于IBD的保护作用研究主要集中在探究生物活
随着电商的兴起,猪肉脯正在从中国传统肉制品向休闲零食转变,市场规模迅速发展。但传统猪肉脯质构坚韧、色泽易劣化,加工中过度氧化易导致不良风味产生,猪肉脯品质亟待升级。变温热风干燥（Variable temperature hot-air drying,VTD）通过分段控制温度,相比于传统的恒温热风干燥（Constant temperature hot-air drying,CTD）,可以提高物料干燥
我国苹果树种植面积广,会产生大量的废弃枝条,造成自然资源的浪费。苹果枝条不仅富含纤维素、半纤维素和木质素,还含有多酚等活性成分,在食品、医药、化工等领域具有潜在的应用价值。本论文以苹果枝条为研究对象,探索其对烘焙蛋制品品质的改善作用,并从中分离出纤维素和木质素,研究其结构特性及应用,本论文为苹果枝条的高值化利用提供了理论依据。主要内容结果如下:（1）以苹果枝条为烘焙辅料,来制备新型蛋制品。通过色差
颗粒物（Particulate Matter,PM）、醛酮化合物（Aldehyde and Ketone Compounds,AKCs）、固态多环芳烃（Polycyclic Aromatic Hydrocarbons,PAHs）和其它挥发性有机化合物（Volatile Organic Compounds,VOCs）是油炸、烧烤食品加工过程中释放油烟污染物的重要组成成分。探究油炸、烧烤加工时释放PM
鸭脖作为重要的禽类产品是近年来非常受欢迎的一款鸭类产品。市售休闲酱卤鸭脖零食均通过真空包装后高温灭菌处理,以达到超长保质期的目的,而此工艺对风味影响较大。目前对肉制品风味形成机理或灭菌方式对肉制品品质改良的研究较多,而热杀菌对肉制品风味影响后的调控鲜有报道,尤其在高温热杀菌领域。基于此本文主要开展热处理条件对真空包装后酱卤鸭脖风味品质的影响,并进行酱卤鸭脖风味品质调控初步探索研究。首先,为探究不同
＜正＞2021年,山东省深入学习贯彻习近平总书记关于精神文明建设的重要论述,紧紧围绕庆祝中国共产党成立100周年这条主线,深化拓展、守正创新,全面提升精神文明建设水平,凝聚起奋进新征程、建功新时代的磅礴力量。思想铸魂深化文明实践,打造覆盖广泛的精神家园。着力推进党的创新理论"飞入寻常百姓家",以庆祝建党100周年和党史学习教育为主题,组织领导干部宣讲团、支部书记宣讲团、先模宣讲团、青年宣讲团、巾帼
草莓果实因富含各种营养成分且酸甜可口,故成为最受欢迎的水果之一。但草莓果实的果皮薄,容易损伤和病原菌感染,采摘后很快就腐烂了。传统上,化学试剂用于果蔬的保鲜,但如果控制不好其用量会导致化学试剂残留在果蔬表面,可能会对环境和人体健康带来潜在危害。因此,需要找到一种天然的生物活性物质来更好的保持草莓果实的营养品质。本文主要是从品质、抗氧化活性、活性氧（ROS）代谢和抗病机理这几个方面探索了白藜芦醇（R