分子印迹技术(molecular impriting polymer, MIP)是一种新型的高效分离技术,它以目标分子为模板,合成出的MIP对印迹分子具有专一识别性。蛋白质分子印迹聚合物具有类似于抗体或受体的高特异识别性,对目标蛋白具有特异性吸附和高选择性,在蛋白质组学、重组蛋白药物等复杂样品的处理中具有重要的应用价值。本文主要以溶菌酶(Lys)和牛血清白蛋白(BSA)为模板分子,采用包埋法合成了溶菌酶和BSA的分子印迹聚合物(Lys-MIP和BSA-MIP),并对二者进行了表征,比较了二者对模板分子的特异性吸附性能；并分别将二者应用蛋清中溶菌酶和血清中白蛋白的分离富集；将Lys-MIP作为蛋白折叠辅助材料,提高了还原变性Lys的复性效率；同时还制备了Lys-MIP磁性复合微球,对其进行了表征,并探索其应用。论文主要包括以下5个部分：1.绪论：主要介绍了分子印迹技术的概念,分子印迹聚合物的制备方法及其应用方面的研究进展,同时亦概述了磁性高分子微球的制备以及其在生物分析中的应用,还对还原变性蛋白的复性方法进行了综述,共引用文献104篇。2.溶菌酶和BSA分子印迹聚合物的制备及表征：以溶菌酶为模板分子,甲基丙烯酸为功能单体,采用包埋法制备了具有选择性识别的溶菌酶分子印迹聚合物(Lys-MIP),并用扫描电镜和红外光谱对Lys-MIP进行了表征。选择性吸附实验证明了溶菌酶分子印迹聚合物对模板分子具有良好的识别性能和特异性吸附。再选用牛血清白蛋白为模板分子作为对比,Lys-MIP表现出更好的印迹效果。结果表明,印迹相对分子质量较大的蛋白质,现在仍是我们面临的一大挑战。3.溶菌酶和BSA分子印迹聚合物的应用：以Lys-MIP为填料,在常压下装填到70 mmX10 mm I.D.简易柱中,从鸡蛋清中分离、纯化溶菌酶,其纯度为96.3%,质量回收率为98.2%。用BSA-MIP分离小牛血清中的牛血清白蛋白,对BSA有很好的吸附,但是对其它蛋白也有吸附,在这个问题上我们仍需再做研究,以达到更好的印迹效果。将BSA-MIP用来去除脐带血中的高丰度蛋白,这对于研究复杂样品中低丰度蛋白有着重要的意义。4.溶菌酶分子印迹磁性复合微球的制备及应用：将Fe3O4磁性微球与溶菌酶分子印迹聚合物结合在一起,采用单体聚合法制备溶菌酶分子印迹磁性复合微球(Lys-MCMs-MIP).制备的Lys-MCMs-MIP用于分离鸡蛋清中的溶菌酶,在外加磁场的作用下,可以非常快捷、方便的分离鸡蛋清中的溶菌酶,为我们的研究工作节约大量时间。分子印迹磁性复合微球还可用于低丰度蛋白的富集、分离,以及复杂样品中高丰度蛋白的去除。5.溶菌酶分子印迹聚合物辅助蛋白复性：探究了用分子印迹聚合物辅助变性蛋白的重折叠。在最佳体系,溶菌酶分子印迹聚合物辅助还原变性Lys复性,活性回收率最高可达90.33%,质量回收率最高可达89.51%。表明分子印迹聚合物能够很好的辅助变性蛋白复性,并探讨了分子印迹聚合物辅助变性蛋白折叠的机理。这为从包涵体中有效复性蛋白提供新方法,同时探讨了分子印迹聚合物辅助变性蛋白复性的折叠机理。