布鲁菌病是中国当前流行较为普遍的人畜共患病,其主要症状为流产、不孕不育以及身体各种组织的局部病灶,布鲁菌病给家畜和人们的身体健康造成了很大影响。本试验对自淄博市分离的马耳他布鲁菌进行基因测序,将Gen Bank中的Vir B 9基因序列与测序结果进行比较,确定Vir B 9的基因序列,设计引物,以淄博市马耳他布鲁菌分离株全基因序列为模板,扩增目的基因,经Nde I和Xho I双酶切,与载体p ET28a（+）连接,获得重组质粒PET28a（+）-Vir B 9,检测后,IPTG诱导含有重组质粒BL21（DE3）感受态细胞中表达Vir B 9。蛋白经Ni纯化柱纯化,SDS-PAGE分析后经Western blot鉴定。以纯化的病毒Vir B 9为包被抗原,建立了间接i ELISA法,并进行条件优化,确定了最适血清稀释度、Vir B 9稀释度、酶标山羊抗牛Ig G-HRP、封闭液、临界值、灵敏度、重复性,初步建成i ELISA方法。在最适反应条件下检测1557份临床样品检测假阳性率、符合率。试验结果如下,Vir B9-i ELISA的假阳性率为0.41%,与RBT、商品化i ELISA、商品化c ELISA、SAT的符合率分别是81.39%、60.95%、99.18%、99.59%,用其他菌的阳性血清进行检测,结果表明,该方法特异性良好。利用该方法对2021年山东省4个季度16个市1111个养殖场采集50397份血清样品进行了检测。经检测,阳性样品主要来自于7个市区的37个养殖场,阳性样品数是254份,群体阳性率是3.33%,个体阳性率是0.50%。经过分析可知,空间上阳性样品主要分布于鲁中地区、鲁南地区和鲁北地区,阳性场出现在免疫区,缓冲带和净化区未出现阳性场;群体上多发于商品代养肉牛场和小于500存栏量的养殖场;季节上春冬季为布鲁菌病发病高峰期。综上所述,本试验建立的Vir B9-i ELISA方法具有较好的敏感性、重复性、特异性,并且与SAT的结果高度符合,其符合率达到99.59%,可以用于临床上进行布鲁菌血清抗体的检测。然后将该方法运用到后续流行病学调查中,用Vir B9-i ELISA和RBT方法初步筛查,SAT和商品化c ELISA诊断。充分掌握2021年牛布鲁菌病的个体阳性率、群体阳性率、三间分布情况。为后续布鲁菌病的防控和净化提供理论依据。