沙门菌（Salmonella）属于肠杆菌科,是兼性厌氧的革兰氏阴性杆菌。沙门菌病是重要的食源性疾病之一,禽类是沙门菌最常见的储存宿主,禽类及其产品的污染与人类沙门菌病的暴发密切相关。肠炎沙门菌（Salmonella Enteritidis）作为最常见的血清型,具有广泛的宿主谱,所有日龄的鸡易感。通常雏鸡感染沙门菌后会引发消化道急性炎症,严重者致死亡,带来重大经济损失;成年鸡常呈隐性感染,且会向环境中排菌,成为传染源;此外,种鸡感染沙门菌后,可垂直传播给子代鸡群,对种禽场造成严重危害。因此,种禽沙门菌的防控与净化对于养禽业和公共卫生安全都尤为重要。生产中常使用病原分离鉴定和血清抗体检测的方法进行沙门菌检测,但研究表明,沙门菌抗体阳性率与病原阳性率不一致,导致净化不彻底,从而影响净化进程。目前商品化抗体检测试剂主要包括平板凝集抗原和ELISA试剂盒两类,两类商品化检测试剂依据原理不同,检测效果参差不齐,因此评估筛选出特异性强、灵敏度高和稳定性好的检测试剂对提高沙门菌检测净化效率和降低生产成本尤为重要。本课题采集了人工感染的SPF鸡不同时间点的血清和拭子,分别进行血清抗体检测和肠炎沙门菌的分离鉴定,以研究肠炎沙门菌感染后的抗体产生规律和排菌规律。此外,本试验还研制了一套肠炎沙门菌阳性参考血清,对商品化平板凝集原和ELISA试剂盒进行评估,为沙门菌净化筛选出优质的抗体检测试剂。主要内容包括:1.肠炎沙门菌人工感染SPF鸡后抗体消长规律试验研究为研究肠炎沙门菌人工感染SPF鸡后抗体消长规律,对16只52日龄SPF鸡进行肠炎沙门菌标准株（CVCC3377）灌服感染,分为10~7 CFU/只和10~8 CFU/只两个剂量组,每个组8只鸡,1周后重复感染。分别在第一次人工感染后第2、5、7、9、12、14、21、28和35天采血并分离血清,用商品化B+D群ELISA试剂盒和鸡白痢、鸡伤寒平板凝集原检测血清中肠炎沙门菌抗体水平,并绘制抗体消长曲线。ELISA抗体检测结果显示:高剂量感染组和低剂量感染组的鸡只抗体动态变化规律一致,两组均在第一次人工感染后第7天开始检测出抗体阳性鸡只（1/8和3/8）,平均抗体水平较低（分别为205.37和447.59）;此后抗体水平不断上升,至第一次感染后28天抗体水平达到高峰;同时,高剂量感染组的同期抗体水平均高于低剂量感染组,高剂量组先于低剂量组抗体阳性率达到100%,且高剂量组100%抗体阳性率的维持时间较长。平板凝集试验检测抗体结果显示:两组分别在第一次感染后第7天和第5天开始检出抗体阳性鸡只（分别为3/8和6/8）,均至第一次感染后14天凝集效价达到高峰,且在高峰前后9天内凝集效价均较高。分别在第一次感染后12天和9天抗体阳性率开始达到最高,分别为75%和100%。2.肠炎沙门菌人工感染SPF鸡后排菌规律及病原学与血清学检测结果相关性分析在采血的同日龄分别采集口腔和泄殖腔拭子进行沙门菌的病原学检测,将不同采样批次中每只鸡的拭子和血清样品分为1组,共144组。结果显示:两组均在第一次人工感染后第7天开始排菌,第一次感染21天后至试验周期结束前的两周内未检出病原,排菌期间病原阳性率为6.25%～25%。病原分离、ELISA和平板凝集的阳性率分别为7.64%、52.78%和67.36%。通过≥1种方法检测为阳性的有102组,其中,仅病原学检测阳性的组数占比0.98%,仅抗体（ELISA或平板凝集）检测阳性的组数占比89.22%,病原和抗体检测均阳性的组数占比9.80%,三种方法检测均阳性的组数占比7.84%。通过计算Kappa系数来判定不同检测方法所得结果的一致性程度,ELISA和平板凝集两种抗体检测方法和病原学检测方法检测结果的一致性程度均微弱,ELISA和平板凝集有中度一致性。结果表明:单一血清学或病原学检测方法不能检出全部阳性鸡只,检测时还应综合考虑检测结果,防止漏检。3.肠炎沙门菌参考血清的制备与应用观察单个鸡只的抗体消长曲线,选出与平均抗体消长曲线吻合度较高的鸡只,分别在抗体产生初期、上升期、高峰期和下降期选取时间点将各筛选鸡只的血清等比例混合,最终获得一组由5份混合血清组成的参考血清。用两种商品化B+D群ELISA试剂盒和一种商品化D群ELISA试剂盒检测该5份混合血清,对所制备参考血清进行标定,结果三种试剂盒所测得抗体消长曲线均符合抗体消长趋势。用制备的参考血清对不同厂家不同批次共7份商品化平板凝集原和三种常用ELISA试剂盒进行特异性、灵敏度和稳定性的评估,结果显示:评估筛选出试剂盒C与平板凝集原B和平板凝集原C的特异性、灵敏度和稳定性较高。结果表明:该方法可有效评估不同检测试剂盒的特异性、灵敏度和稳定性,成为评估筛选常用ELISA试剂盒和平板凝集原的有力工具。本试验研究了肠炎沙门菌人工感染SPF鸡后排菌规律和抗体消长规律,分析了病原学与血清学检测结果的相关性,并研制了肠炎沙门菌参考血清,初步建立禽沙门菌平板凝集原和ELISA试剂盒的质量评估方法,为沙门菌病净化提供理论支持和筛选优质检测试剂。